Elucidation of the gene expression cascade responsible for male sexuality and acquisition of fertility

阐明负责男性性行为和获得生育能力的基因表达级联

• 批准号: 20H00469
• 负责人: 本多 新
• 金额: $ 27.46万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H00469/
• 关键词: 性決定; 絶滅危惧種; iPS細胞; 生殖巣; 生殖細胞; アマミトゲネズミ; 胚盤胞補完法; マウス; ラット; 生殖細胞体外再構築

本研究はY染色体に依存しない性染色体様式XO型で雌雄を生じる、絶滅危惧種のアマミトゲネズミからiPS細胞を樹立し、どのように雌雄が生じるのかを解明することを目的としている。今年度はオス特異的なゲノム領域の解析と、そのシステムを雌iPS細胞へ導入、および生殖巣補完の予備実験を行った。また、トゲネズミ由来iPS細胞をより効率よくキメラとして生殖系列に寄与させるために、新規iPS細胞株を樹立する研究にも着手し始めた。これまでに樹立したアマミトゲネズミのオス由来iPS細胞はキメラとしてマウスに寄与する能力に乏しく、また生殖系列にも寄与しないことから、これまでとは異なる体細胞株を用い、かつリプログラム因子についてもより質の高い多能性幹細胞として樹立可能となる因子を導入して樹立している。一方、トゲネズミの全ゲノム解析より明らかになった雄性決定様式を雌に導入することで、実際にその仕組みがXO型動物の雄性決定に関与するのか否かを解析している。CRISPR/Cas9を用いた生殖巣補完については、胚をマウスおよびラットで行ったが、F0世代でホモの胚が生じる効率だけでなく、トゲネズミiPS細胞が寄与する効率の問題もあるため、期待していたほどの補完胚が得られなかった。そこで、ヘテロ欠損でも補完できるDTAシステムを導入し、現在予備実験を行っている。このシステムが機能すれば補完用のホスト胚効率を自在に操作できる。

This study は Y chromosome に dependent し な い sex chromosome others type the XO で born male and female を じ る, extinction of it kind of の ア マ ミ ト ゲ ネ ズ ミ か ら iPS cells を し, ど の よ う に born male and female が じ る の か を interpret す る こ と を purpose と し て い る. Our は オ ス specific な ゲ ノ の ム field analytical と, そ の シ ス テ ム を female iPS cells へ import, お よ び reproductive 巣 fill out の reserve be 験 を line っ た. ま た, ト ゲ ネ ズ ミ origin iPS cells を よ り sharper rate よ く キ メ ラ と し て reproductive series に send さ せ る た め に, new rules iPS cell lines を set す る research に も beginning to し め た. こ れ ま で に set し た ア マ ミ ト ゲ ネ ズ ミ の オ ス origin iPS cells は キ メ ラ と し て マ ウ ス に send す る ability に spent し く, ま た reproductive series に も send し な い こ と か ら, こ れ ま で と は different な る somatic cell strains を い, か つ リ プ ロ グ ラ ム factor に つ い て も よ り の high quality い pluripotent stem cells と し て may establish と な The る factor を is imported into <s:1> て to establish <s:1> て る る. Side, ト ゲ ネ ズ ミ の full ゲ ノ ム parsing よ り Ming ら か に な っ た male decided to others in female type を に import す る こ と で, be interstate に そ の blackstone group み が the XO の male animals decided に masato and す る の か no か を parsing し て い る. CRISPR/Cas9 を with い た reproductive 巣 fill out に つ い て は, embryo を マ ウ ス お よ び ラ ッ ト で line っ た が, F0 generation で ホ モ の embryo が raw じ る sharper rate だ け で な く, ト ゲ ネ ズ ミ iPS cells が send す る sharper rate の problem も あ る た め, expect し て い た ほ ど の fill the embryo が must ら れ な か っ た. そ こ で, ヘ テ ロ owe loss で も fill out で き る DTA シ ス テ ム を import し, now to be prepared 験 を line っ て い る. The <s:1> システムが システムが function すれば is completed by using the <s:1> ホスト embryo efficiency を to freely operate に で る る.

项目成果

絶滅危惧種を知るために精子と卵子をつくりだす

创造精子和卵子以了解濒危物种

• 发表时间: 2022
• 作者: Shirakawa Makoto;Morisaki Yukaho;Gan Eng-Seng;Sato Ayato;Ito Toshiro;本多新
• 通讯作者: 本多新

A Simple and Efficient Method for Generating KO Rats Using In Vitro Fertilized Oocytes

一种利用体外受精卵产生 KO 大鼠的简单有效方法

• DOI: 10.1007/978-1-0716-3016-7_18
• 发表时间: 2023
• 期刊: Methods in Molecular Biology
• 作者: Kohtaro Morita;Arata Honda;Masahide Asano
• 通讯作者: Masahide Asano

Gene Targeting in Rabbits: Single-Step Generation of Knockout Rabbits by Microinjection of CRISPR/Cas9 Plasmids

家兔基因打靶：通过显微注射 CRISPR/Cas9 质粒一步生成敲除家兔

• DOI: 10.1007/978-1-0716-3016-7_20
• 发表时间: 2023
• 期刊: Methods in Molecular Biology
• 作者: 高桑央;廣瀬哲郎;Kurumizaka Hitoshi;Arata Honda
• 通讯作者: Arata Honda

不等分裂抑制剤、染色体異数性抑制剤、培地、体外受精培地、細胞処理キット、不等分裂抑制方法、体外受精方法、移植方法、不妊治療方法、及び産仔取得方法

不对称分裂抑制剂、染色体非整倍体抑制剂、培养基、体外受精培养基、细胞处理试剂盒、抑制不对称分裂的方法、体外受精方法、移植方法、不孕症治疗方法以及窝获得方法

• 发表时间: 2022