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Mechanisms of tunic softening in Halocynthia roretzi infected with a pathogenic flagellate, Azumiobodo hoyamushi

感染致病性鞭毛虫 Azumiobodo hoyamushi 的 Halocynthia roretzi 被膜软化的机制

基本信息

批准号：
20H03074
负责人：
北村真一
金额：
$ 9.07万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はマボヤ被嚢軟化症の被嚢軟化機構に注目し、研究を進めている。これまでの研究結果から、軟化個体において、被嚢の主成分であるセルロースは分解されていないことが分かった。本課題では、Azumiobodo hoyamushi（ホヤムシ）が分泌するプロテアーゼが被嚢中のタンパク質を分解することで構造が崩壊すると仮説を立て、それを検証する。個別の目的としては、被嚢のプロテオーム解析を行い、軟化に伴って減少するタンパク質を探索する。それを大量発現し、抗体を作製する。作製した抗体を用いて、健常個体と軟化個体の被嚢を免疫染色することで、そのタンパク質が軟化に関わっているかを確認する。一方、ホヤムシのプロテアーゼに関しては、分泌性プロテアーゼが含まれる培養液を用いて、人工ペプチド基質の分解アッセイを行い、そのプロファイルから病原性因子を推測し、それを大量発現する。最終的には、in vitroで被嚢切片または大量発現した被嚢タンパク質に合成プロテアーゼを作用させることで、軟化を再現する。昨年度、2-D Fluorescence Difference Gel Electrophoresisおよびショットガン解析によって、軟化に伴い減少するタンパク質の検出には成功したものの、ターゲットタンパク質を絞り込むことができなかった。そこで、本年度は、これまでとは手法を変え、病理組織切片を作製し、肉眼で軟化している部分を確認し、レーザーマイクロダイセクション法にて、サンプル回収した。本サンプルをショットガン解析し、軟化に伴って減少する被嚢タンパク質を網羅的に解析し、減少するタンパク質を4つに絞り込んだ。ホヤムシのプロテアーゼに関しては、20個の人工合成基質を用いて、本虫が分泌するプロテアーゼのプロファイルを明らかにした。

I want to show you how much attention and research has been given to this disease. The results of this study are as follows: 1. Softening individual components, 2. This topic is about the establishment and verification of Azumiobodo hoyamushi secretion and its structure. The purpose of the individual is to analyze, soften and reduce the quality of the product. A large number of antibodies were produced. Immunostaining for antibodies, healthy individuals, and soft tissues A large number of pathogenic factors have been predicted and found in culture medium containing a variety of factors, such as the use of culture medium, the decomposition of artificial selection medium, and the production of secretory factors. Finally, in vitro, a large number of samples were produced. Last year, 2-D Fluorescence Difference Gel Electrophoresis was successfully analyzed and softened to reduce the quality of the product. This year, the method was changed, and pathological sections were prepared to confirm the changes. This article analyzes, softens, and reduces the quality of the product. 20 synthetic substrates were used in the production of the protein.

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

被嚢軟化症はマボヤの生体防御能に影響を与えるか？

被囊软化症会影响马博亚的生物防御能力吗？

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
宮崎善弥;阿見彌典子;吉永龍起;天野勝文;米田道夫，中村政裕，森岡泰三，阿見彌典子，冨山　毅;柳田哲矢
通讯作者：
柳田哲矢

Invertebrate Pathology

无脊椎动物病理学

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Somamoto T.;Nakanishi T.;太田英輔，阿利拓夢，山本俊，飯田洋輝，小澤芳樹，阿部正明，大垣拓也，松井康哲，池田　浩;Andrew F. Rowley and Shin-Ichi Kitamura
通讯作者：
Andrew F. Rowley and Shin-Ichi Kitamura

数値化した被嚢の硬さから見たマボヤ被嚢軟化症

从被膜的量化硬度看出 Maboya 被膜软化症