エピトープスプレディング現象に着目した水疱性類天疱瘡の病態解明

以表位扩散现象为重点阐明大疱性类天疱疮的病理学

• 批准号: 20H03700
• 负责人: 西江 渉
• 金额: $ 11.32万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03700/
• 关键词: 自己免疫疾患; 皮膚病態学

2020年度は、18名の水疱性類天疱瘡患者（DPP4阻害薬内服中の症例を含む）末梢血単核球中のB細胞をEBウイルスを用い形質転換した。樹立したLymphoblastoid cell lineの培養上清を用い、水疱性類天疱瘡抗原であるBP180タンパクへの自己抗体の反応性をELISA法で確認したところ、全ての患者さん由来細胞でIgGクラス自己抗体の反応性は確認できなかった。しかし、6名のLymphoblastoid cell line培養上清に坑BP180 IgMクラス自己抗体を確認したため、形質転換した細胞群から単一あるいはポリクローナルな状態での、坑BP180自己抗体産生細胞の採取をFACSソーティングで試みた。その結果、坑BP180自己抗体産生細胞数が極めて少なかったことと、蛍光標識BP180タンパクが細胞表面に結合した後のエンドサイトーシスに伴う蛍光の減弱のため、細胞の単離は上手くいかなかった。そこで、pH耐性緑色蛍光タンパクであるGamillusを融合したBP180タンパクを作製し、再度FACSソーティングを行うこととした。細胞を単離したのち、次世代シークエンサーによる自己抗体可変領域のアミノ酸配列の解読と、リコンビナント坑BP180自己抗体の作製、そしてマウスへ投与し病原性の確認を計画しそれぞれの予備実験を開始していたが、今後の研究を遂行できなくなったため、2021年以降の交付申請は辞退することにした。

In 2020, <s:1> B cells in the peripheral blood of 18 patients with <s:1> vesicular pemphigoid (cases of <s:1> during oral administration of DPP4 inhibitors を including む) をEBウ スを スを were exchanged for た with <s:1> cytoplasm 転 in the 単 nuclear globules of <s:1> patients. Establish し た Lymphoblastoid cell line の culture supernatant を with い, bullous pemphigoid antigen で あ る BP180 タ ン パ ク へ の antibody の anti 応 their sexual を で ELISA method to confirm し た と こ ろ, whole て の patients さ ん origin cells で IgG ク ラ ス antibody の anti 応 their sexual は confirm で き な か っ た. <s:1> に に supernatant of 6 Lymphoblastoid cell line culture に pit BP180 IgM ク ラ ス を confirm their antibody し た た め, form quality planning in し た cells か ら 単 a あ る い は ポ リ ク ロ ー ナ ル な state で の BP180 antibodies produce their cells, pit の take を both FACS ソ ー テ ィ ン グ で try み た. そ の results, pit BP180 myself antibody generation cell number が め て less な か っ た こ と と 蛍 light logo BP180 タ ン パ ク が cell surface に combining し た after の エ ン ド サ イ ト ー シ ス に with う 蛍 light weakened の の た め, cell の 単 from は overhand く い か な か っ た. そ こ で, pH tolerance 蛍 green light タ ン パ ク で あ る Gamillus を fusion し た BP180 タ ン パ ク を as し, again both FACS ソ ー テ ィ ン グ を line う こ と と し た. Cell を 単 from し た の ち, next generation シ ー ク エ ン サ ー に よ る their antibodies could - field の ア ミ ノ acid with column の solution 読 と, リ コ ン ビ ナ ン ト pit BP180 making system, そ antibody の し て マ ウ ス へ cast with し pathogenicity の confirm を project し そ れ ぞ れ の reserve be 験 を began し て い た が, future study を carries out で の き な く な っ た た め, Since 2021, applications for the delivery of する dismissal する とに た た た have been submitted.