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mRNA trans-splicingを応用した表皮水疱症モデルマウスの治療

mRNA转拼治疗大疱性表皮松解症模型小鼠

基本信息

批准号：
20659171
负责人：
西江渉
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20659171/
关键词：
生体分子細胞・組織遺伝子治療タンパク質応用動物

项目摘要

本研究では、先天的に皮膚が脆弱で外的刺激により容易に水庖を形成する遺伝病である表皮水庖症(EB)のモデルマウスであるCol17KOマウスを用い、mRNAのスプライシング過程で遺伝子変異を修復する治療法について検討した。Col17KOマウスは、エクソン2がPGK-neoに置換されており、治療用分子として、正常なCol17 exon2, 3を含みイントロン4に相補的に結合するmRNA発現ベクターを作成した。その際、イントロン4との結合部位(バインディングドメイン : BD)を、(1)313bp(エクソン4寄り)、(2)313bp(エクソン3寄り)、(3)BD1, 2がオーバーラップした511bpの3種作成した。その結果、いずれのBDを有する治療法分子においても、スプライシングの過程で外的に導入発現した正常なCol17 exon2, 3が組み込まれ、正常のCol17 mRNA、そしてCOL17タンパクが発現したことが確認できた。3種のBDの中では511bpのBD2が最も効率が良かった。Spliseosome-Mediated RNA Trans-splicing(SMaRT)として近年報告されている本手法は、全長のcDNAを導入する古典的な遺伝子治療に比較して(1)治療用分子が小さくてよい、(2)導入遺伝子(RNA)過剰発現されても正常以上にタンパクが産生されることがない、(3)優性遺伝性疾患にも有用である、などの利点がある一方、(1)治療効率が劣ることが多い、(2)これまでの報告は主に3'側の変異による検討が主である、という問題点が挙げられる。本研究で用いたCol17KOマウスでは、エクソン2がPGK-neoに置換されているため、これまで報告が少なかった5'側のtrans-splicingの有用性について検討でき、5'側においても治療効果がある事が示された。しかし、今後の臨床応用には、正常のCOL17タンパク発現量を増やすなど更なる改良が必要である。今後、EBに対する新規治療法開発に向けて治療効果改善について検討していきたい。

This study is aimed at exploring the treatment of epidermal edema (EB) due to the innate weakness of the skin and its susceptibility to external stimuli. Col17KO exon2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, Three kinds of binding sites (BD),(1)313bp(),(2)313bp (),(3) BD1,(2) 511bp (),(3)BD1,(3) BD2,(4) and (5) are used. The results showed that the expression of normal Col17 exon2, 3 and normal Col17 mRNA was detected in all the therapeutic molecules. 3 kinds of BD in the middle of the 511bp BD 2 is the most effective rate. Splice-Mediated RNA Trans-splicing(SMaRT) has been reported in recent years. This method is used to introduce full-length cDNA into classical gene therapy.(1) Therapeutic molecules are small,(2) RNA is introduced into the genome, and (3) Optimal gene diseases are useful.(1) The treatment efficiency is poor,(2) The report is poor,(3) The problem point is poor,(3) The problem point is poor,(4) The problem point is poor. In this study, we reported the usefulness of trans-splicing with Col17KO and PGK-neo on the 5'side. For future clinical use, it is necessary to improve the normal COL17 detection rate. In the future, the development of new treatment methods for EB should be carried out in order to improve the treatment effect.