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易傷害性肝グラフトの至適体外灌流法と非侵襲的グラフト機能評価法の開発

易损伤肝移植物最佳体外灌注方法及无创移植物功能评价方法的建立

基本信息

批准号：
20H03737
负责人：
嶋村剛
金额：
$ 11.48万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

肝移植におけるドナー不足は未解決であり、心停止肝や脂肪肝の安全な利用が望まれる。本課題は、1) MPの至適条件、2) MP中の薬物性コンディショニングの効果を明らかにし、それらの試料解析により、3) 移植前グラフト機能評価法の確立を目指して検討した。SHRSP5-Dmcr ratに高脂肪高コレステロール食を給餌し、脂肪肝を作成し、脂肪化の程度をMRIで評価する方法論を確立した。脂肪肝を新液で冷保存し、再灌流後の肝機能を評価したが、強い保護効果の提示には至らなかった。ラット長時間冷保存肝、心停止肝の３時間冷保存をpH調整UW-MP液で機械灌流し、各温度での至適pHを見出した (data非開示)。また、これらの易障害性肝グラフトに対する機械灌流中の水素ガス投与は血管抵抗を減弱したが、臓器機能の改善には至らなかった。しかし、末梢循環改善によって末梢組織の構築は著明に改善された。肝表面から水素ガスを浸透させることで末梢循環を制御できる可能性が示唆された。各温度で灌流した肝組織は、機械灌流終了時はもとより、37℃再灌流後にもミトコンドリアのクリステの構造が保たれていた。また、電子伝達系複合体Ⅰの機能障害で漏出するフラビンモノヌクレオチド (FMN) を低温酸素化灌流の灌流液でHPLC測定すると、FMN量が再灌流後の胆汁産生量、ALT漏出などを予測し得るマーカーであったが、同じ蛍光波長で検出されるリボフラビン (RF)、フラビンアデニンジヌクレオチド (FAD) は障害の予測には適さず、HPLCで分離してから蛍光測定することが重要と考えられた。タンパク質、メタボローム、レドックス・酸化ストレス、オスミウム浸軟SEM、LC-MS/MS (リピドミクス)などの解析条件を確立したので、各温度での機械灌流の至適pHで灌流した肝組織の採取を終え、順次解析を進めている。

Liver transplantation is not enough to solve the problem, cardiac arrest liver and fatty liver safety use is expected. This paper discusses: 1) the optimum conditions of MP; 2) the determination of the effect of MP's physical properties; 3) the establishment of the method of pre-transplant functional evaluation. SHRSP5-Dmcr rat high fat diet, fatty liver production, fatty liver degree evaluation methodology established Liver function evaluation after cold preservation and reperfusion of fatty liver Long-term cold preservation of liver, cardiac arrest of liver 3-time cold preservation, pH adjustment of UW-MP solution, mechanical perfusion, pH adjustment at various temperatures (data not shown) In addition, there is a reduction in water supply and vascular resistance in mechanical perfusion, and an improvement in organ function. The improvement of peripheral circulation and the construction of peripheral tissues are obvious. The possibility of controlling the peripheral circulation of the liver surface is demonstrated. The structure of liver tissue was preserved after reperfusion at 37℃. The functional impairment of electron transfer system complex I was detected by HPLC in the perfusion solution of low temperature acidizing (FMN). The amount of FMN was detected by HPLC in the perfusion solution of low temperature acidizing (FMN). The amount of FMN was detected by HPLC in the perfusion solution of low temperature acidizing (FMN). The amount of ALT leakage was detected by HPLC in the perfusion solution of low temperature acidizing (FMN). The amount of FMN was detected by HPLC in the perfusion solution of low temperature acidizing (FMN). HPLC separation is important for photometric determination. The analysis conditions of SEM, LC-MS/MS were established, and the mechanical perfusion at various temperatures and the optimal pH of the perfusion were obtained.