肝移植におけるsiRNAと機械灌流法を用いたシグナル遮断による虚血再灌流傷害抑制

肝移植中使用siRNA和机器灌注信号阻断抑制缺血再灌注损伤

• 批准号: 22K16436
• 负责人: 藤好 真人
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16436/
• 关键词: 肝移植; 機械灌流; 核酸治療; 虚血再灌流傷害; 臓器保存

当研究では体外機械灌流法を導入したマウス肝移植モデルを実験系として用いる。前実験において、リポフェクション法を用いた肝臓へのsiRNAトランスフェクションは数時間で行うことができる一方で非生理的低温下では導入効率が著しく低下することが分かっている。そのため、本研究においてsiRNAの体外導入は37℃での常温機械灌流を介して行う予定である。マウス肝移植において常温機械灌流を導入した報告はこれまでにないため、当研究ではまずその技術的確立が必要となる。我々はこれまでに低温機械灌流およびsub-normothermic machine perfusionには成功しているが、これらに比べて常温機械灌流は酸素担体による酸素送達、灌流液の品質維持、灌流ダイナミクスの精密な制御など技術的要求が高く、今年度はその条件検討に多くの時間を費やした。常温機械灌流では低温機械灌流に比べ、より正確な門脈灌流圧測定とポンプコントロールを要するため、灌流装置の改良を行った。酸素担体として赤血球を含有する灌流液を充分量作成することはマウスでは難しいため、血液ドナーからの高効率の赤血球採取法の開発および灌流回路の小ボリューム化を進めた。灌流温度の上昇と灌流液の小ボリューム化は灌流中における灌流液の急激な品質低下につながるため、その条件検討に多くの時間を費やしている。灌流回路については、横隔膜を合併摘出し、肝上部下大静脈を閉鎖する術式によりドレナージ系を閉鎖回路化することにより灌流液ボリュームの大幅な減量を可能とした。

在这项研究中，将引入体外机械灌注方法的小鼠肝移植模型用作实验系统。在先前的实验中，可以在几个小时内使用LiPofection方法转染到肝脏中，而在非物理上低温下，转导效率显着降低。因此，在这项研究中，将在37°C下在室温下通过机械灌注在体外引入siRNA。由于尚未据报道在小鼠肝移植中引入室温机械灌注，因此该研究首先需要建立技术技能。到目前为止，我们已经在冷机灌注和亚电热机灌注方面取得了成功，但是与之相比，室温机灌注具有很高的技术要求，例如氧气载体的氧气输送，灌注溶液的维持以及对灌注动态的精确控制，我们花了很多时间来检查条件。灌注装置得到了改善，因为室温机械灌注需要比冷机灌注更准确的门户灌注压力测量和泵控制。由于小鼠很难产生足够量的灌注液，其中含有红细胞作为氧载体，因此我们开发了一种高效的方法来从供血者那里收集红细胞，并使灌注回路变得更小。灌注温度升高和少量的灌注液会导致灌注过程中灌注液的质量突然下降，因此花费了很多时间检查条件。关于灌注回路，通过手术去除隔膜并关闭上脑肾上腺下腔静脉，可以大大减少灌注液体积。