肝移植におけるsiRNAと機械灌流法を用いたシグナル遮断による虚血再灌流傷害抑制

肝移植中使用siRNA和机器灌注信号阻断抑制缺血再灌注损伤

• 批准号: 22K16436
• 负责人: 藤好 真人
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16436/
• 关键词: 肝移植; 機械灌流; 核酸治療; 虚血再灌流傷害; 臓器保存

当研究では体外機械灌流法を導入したマウス肝移植モデルを実験系として用いる。前実験において、リポフェクション法を用いた肝臓へのsiRNAトランスフェクションは数時間で行うことができる一方で非生理的低温下では導入効率が著しく低下することが分かっている。そのため、本研究においてsiRNAの体外導入は37℃での常温機械灌流を介して行う予定である。マウス肝移植において常温機械灌流を導入した報告はこれまでにないため、当研究ではまずその技術的確立が必要となる。我々はこれまでに低温機械灌流およびsub-normothermic machine perfusionには成功しているが、これらに比べて常温機械灌流は酸素担体による酸素送達、灌流液の品質維持、灌流ダイナミクスの精密な制御など技術的要求が高く、今年度はその条件検討に多くの時間を費やした。常温機械灌流では低温機械灌流に比べ、より正確な門脈灌流圧測定とポンプコントロールを要するため、灌流装置の改良を行った。酸素担体として赤血球を含有する灌流液を充分量作成することはマウスでは難しいため、血液ドナーからの高効率の赤血球採取法の開発および灌流回路の小ボリューム化を進めた。灌流温度の上昇と灌流液の小ボリューム化は灌流中における灌流液の急激な品質低下につながるため、その条件検討に多くの時間を費やしている。灌流回路については、横隔膜を合併摘出し、肝上部下大静脈を閉鎖する術式によりドレナージ系を閉鎖回路化することにより灌流液ボリュームの大幅な減量を可能とした。

When the で は machine perfusion in vitro method を import し た マ ウ ス liver transplantation モ デ ル を be 験 department と し て in い る. Before be 験 に お い て, リ ポ フ ェ ク シ ョ を ン method with い た routine liver へ の siRNA ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン は line number time で う こ と が で き る non-physical under the low temperature side で で は import が the working rate し く low す る こ と が points か っ て い る. そ の た め, this study に お い て siRNA in vitro の import は 37 ℃ で の room temperature mechanical perfusion を interface し て line う designated で あ る. マ ウ ス liver transplantation に お い て room temperature mechanical perfusion を import し た report は こ れ ま で に な い た め, when the で は ま ず そ の technology to establish necessary と が な る. I 々 々 れまでに れまでに れまでに cryogenic mechanical perfusion およびsub-normothermic machine Perfusion に は successful し て い る が, こ れ ら に than べ て room temperature mechanical perfusion は acid element supporter に よ る acid element service, the perfusion fluid の quality maintenance, perfusion ダ イ ナ ミ ク ス の precision な suppression な ど が demanding く technology, our は そ の condition more than beg に 検 く の time を や し た. Room temperature mechanical perfusion で は cryogenic mechanical perfusion に than べ, よ り な right portal vein perfusion 圧 determination と ポ ン プ コ ン ト ロ ー ル を to す る た め line, perfusion device の improvement を っ た. Acid element supporter と し て red blood corpuscle を contains す る perfusion fluid を full amount done す る こ と は マ ウ ス で は difficult し い た め, blood ド ナ ー か ら の の red blood cell adopt high working rate method の open 発 お よ び perfusion loop の small ボ リ ュ ー ム change を into め た. Perfusion temperature rising の と perfusion fluid の small ボ リ ュ ー ム change は perfusion in に お け る low perfusion liquid の nasty shock な quality に つ な が る た め, そ の condition more than beg に 検 く の time を や し て い る. Perfusion loop に つ い て は, diaphragm を merger pick out し, subordinates on liver vena cava を atresia す る operation に よ り ド レ ナ ー ジ department を locking loop turn す る こ と に よ り perfusion fluid ボ リ ュ ー ム の sharply reducing な を may と し た.