再生分化による網膜の機能再現と網膜変性疾患の新規治療

通过再生分化再现视网膜功能和视网膜退行性疾病的新疗法

• 批准号: 20H03845
• 负责人: 世古 裕子
• 金额: $ 11.4万
• 依托单位: National Rehabilitation Center for Persons with Disabilities
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03845/
• 关键词: 網膜; ダイレクト・リプログラミング; 視細胞様細胞; ミューラー細胞; 神経節細胞; 網膜視細胞モデル; ポリシストロニックベクター; 変性視細胞モデル; 網膜双極細胞; 網膜視細胞; 病態解析; 薬剤スクリーニング; 再生; ミュラー細胞; 再生医療; 網膜変性モデル

網膜は一度損傷を受けると回復しない。本研究は、視覚障害の原因となる網膜変性疾患の病態解明や創薬に応用するため、低コスト・簡便で汎用性が高い細胞培養システムを確立するための基盤的研究である。これまでに、視細胞の発生に関わる４種類の転写因子を用いたダイレクト・リプログラミングで、ヒト皮膚線維芽細胞から約１週間で光刺激に応答する視細胞様細胞を分化誘導できること、この方法で作製した網膜色素変性患者細胞由来の変性視細胞モデルが病態解析の一助になる可能性を示した。令和３年度には、スモールスケール（24-well plateの使用）のアッセイ系で、ヒト皮膚線維芽細胞由来変性視細胞モデルの半定量評価を行い、光トランスダクション関連遺伝子などが変性視細胞モデルにおいて発現低下していること、ERストレス阻害剤（4-PBA）によって発現がノーマライズされることを明らかにし、薬剤スクリーニングへの応用の可能性を示した（令和４年度に国際誌に掲載、業績欄参照）。令和４年度には、誘導レベルの不完全性と不均一性の改善に向けた実験にもエフォートを割いた。網膜分化関連転写因子が異なる順で結合された３種類のポリシストロニックベクター（視細胞ポリベクター）を用い、網膜発生過程の再現に関する検証、分化レベルの検証を継続した。同時に、ダイレクト・リプログラミングの適応拡大、すなわち低コスト・鋭敏な評価系を目指し、これまでの24-well プレートから、あらたに96-wellを用いた分化誘導とアッセイを試み、これまでと同様の結果が得られるかどうかを調べ、上記実験に用いた。また、患者細胞モデルの実験も継続し、EYSと光トランスダクション、細胞死との関連等を調べ、網膜変性機序の全容解明に向けて解析を継続した。さらに、ゼブラフィッシュモデルの解析結果も統合することを目指し、ノックアウトの繁殖を行った。

The omentum was damaged once and recovered. In this study, the cause of visual impairment, the morbidity of retinal degenerative diseases, the pathological explanation, the use of trauma and treatment, and the lowコスト・Simple, highly versatile, and research on cell culture システムを established the basis of するためのである.これまでに、Optical cell の発生に关わる４ types of の転WRITING FACTOR を用いたダイレクト・リプログラミングで、ヒトSkin line fibroblast cellsからIt takes about 1 week to stimulate the light and respond How to induce the differentiation of photoreceptor cells, how to make them, how to make cells from patients with retinal pigment disease, how to analyze the pathology of photoreceptor cells, how to analyze the possibility of it, and how to do it.には、スモールスケール（24-well） Use of plate) Semi-quantitative evaluation of optic cells derived from のアッセイ system and ヒト skin line dimensional bud cellsを行い、光トランスダクションrelated legacy 伝子などが変synthetic optic cells モデルにおいて発appears to be low していること、ERストレス剤（4-PBA）によって発开がノーマライズされることを明らかにし, 薬剤スクリーニングへの応用的の综合した (refer to the publication and performance column of the 4th Annual Reiwa International Journal). In the 4th year of Reiwa, the improvement of the incompleteness and unevenness of the induced レベルのに to the けた験にもエフォートをcut いた. Omentum differentiation-related factors Cell ポリベクター）をい, reappearance of omentum development process, に椋検 syndrome, differentiation レベルの検 syndrome, を継続した. At the same time に、ダイレクト・リプログラミングのfit応拡大、すなわちLow コスト・鋭sensitivity evaluation system を Eyes refers to し、これまでの24-wellプレートから、あらたに96-wellを Use いたdifferentiation induction とアッセイを testみ, これまでと同様の results がget られるかどうかを Adjust べ, 上记実験に用いた.また, patient cell モデルの実験も継続し, EYS と光トランスダクション, fine The relationship between cell death and other factors is adjusted, and the complete explanation of the omentum's sexual mechanism is explained and analyzed.さらに、ゼブラフィッシュモデルのanalytic result もintegration することを Eye refers to し、ノックアウトの breeding を行った.

项目成果

Involvement of the C‐terminal domain in cell surface localization and G‐protein coupling of mGluR6

C 末端结构域参与 mGluR6 的细胞表面定位和 G 蛋白偶联

• DOI: 10.1111/jnc.15217
• 发表时间: 2020
• 期刊: Journal of Neurochemistry
• 影响因子: 4.7
• 作者: Rai Dilip;Akagi Takumi;Shimohata Atsushi;Ishii Toshiyuki;Gangi Mie;Maruyama Takuma;Wada‐Kiyama Yuko;Ogiwara Ikuo;Kaneda Makoto
• 通讯作者: Kaneda Makoto

シンポジウム1 視覚再生/オプトジェネティクスと創薬「オプトジェネティクスを用いた新たな網膜機能の付与」

研讨会1视觉再生/光遗传学和药物发现“利用光遗传学改善视网膜新功能”

• 发表时间: 2022
• 作者: 菅野江里子;畠山暁斗，田端希多子;佐山達紀，小野口玲奈;遠藤 由佳;木村悠;冨田浩史
• 通讯作者: 冨田浩史

シンポジウム1「オプトジェネティクス遺伝子を利用した視覚再建のための遺伝子治療」

研讨会1“利用光遗传学基因进行视觉重建的基因治疗”

• 发表时间: 2022
• 作者: Y. Sung;H. Guo;A. Ghasemizadeh;X. Shen;W. Chintrakulchai;M. Kobayashi;M. Toyoda;K. Ogi;J. Michinishi;T. Ohtake;M. Matsui;Y. Honda;T. Nomoto;H. Takemoto;Y. Miura;N. Nishiyama;冨田浩史
• 通讯作者: 冨田浩史

眼の発生と先天異常. やさしい小児の眼科

眼睛发育和先天性异常。

• 发表时间: 2023
• 作者: Yoshida S;Hatasa M;Ohsugi Y;Tsuchiya Y;Liu A;Niimi H;Morita K;Shimohira T;Sasaki N;Maekawa S;Shiba T;Hirota T;Okano T;Hirose A;Ibi R;Noritake K;Tomiga Y;Nitta H;Suzuki T;Takahashi H;Miyasaka N;Iwata T;Katagiri S;東 範行
• 通讯作者: 東 範行

The transcriptome of wild-type and immortalized corneal epithelial cells.

• DOI: 10.1038/s41597-021-00908-9
• 发表时间: 2021-05-07
• 期刊: Scientific data
• 影响因子: 9.8
• 作者: Furuya K;Wu T;Orimoto A;Sugano E;Tomita H;Kiyono T;Kurose T;Takai Y;Fukuda T
• 通讯作者: Fukuda T