糸状菌 SSPs と栄養基質分解酵素の新奇相互作用モデルの構築への挑戦

构建丝状真菌 SSP 与营养底物降解酶之间新型相互作用模型的挑战

基本信息

批准号：
20J01300
负责人：
寺内裕貴
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

糸状菌は、宿主や栄養基質に侵襲する際、多種類のSSPsを分泌するが、その機能はほとんど明らかになっていない。また、糸状菌がSSPsと同時に分泌する栄養基質分解酵素とSSPsの関係性も、ハイドロフォビンRolA-クチナーゼ系やハイドロフォビンと類似した固体吸着能を示すHsbA-クチナーゼを除いてほとんど知られていない。RolA-クチナーゼ系のような相互作用は限定的な環境で見出されたため、同様の現象が他のSSPsと栄養基質分解酵素間に見出されるかは不明である。様々な基質を用いて麹菌を培養し、セクレトーム解析を行った。その結果、キシランを単一炭素源として麹菌を培養した際、キシラン特異的なSSPsを同定した。これらのSSPsについて発現解析を行った結果、キシラン培養において発現に有意な差が生じた。SSPsの破壊株を作製し表現型解析を行った。その結果、破壊株のキシラン分解能については有意差が見出せなかった。現在はSSPs恒常発現株を造成し、培養上清のキシラン分解能などを調べ、これらの結果をもって論文にまとめる予定である。また、SSPs過剰発現株も造成しており、SSPsと酵素の精製、および相互作用について解析する予定である。他の糸状菌（トウモロコシごま葉枯病菌、灰色カビ病菌、ヒラタケ）に関しても同定された基質特異的なSSPsについて破壊株の表現型などを解析し、論文にまとめる予定である。麹菌SSPsの解析の過程で見出されたハイドロフォビンについても解析している。破壊株のストレス耐性を調べたところ、界面活性剤を入れると生育が野生型より遅くなった。また、ハイドロフォビンの自己組織化膜が分生子表面から消失しているのがSEMで観察された。現在はハイドロフォビン蛍光タンパク質融合タンパク質発現株を造成し、ハイドロフォビンの局在を調べ、論文にまとめる予定である。

当丝状真菌入侵宿主和营养底物时，它们会分泌各种各样的SSP，但它们的功能在很大程度上是未知的。除丝状真菌和SSP同时与SSP分泌的滋养基细胞溶酶之间的关系也鲜为人知，除了疏水性Rola-核酸蛋白酶系统和HSBA - 核酶表现出类似于盐水Rola rola cutinase System and Hybroa酶系统和疏水素。由于在有限的环境中发现了诸如rola-cutinase系统之类的相互作用，因此尚不清楚其他SSP和营养底物降解酶之间是否发现类似现象。使用各种底物培养了曲霉，并进行了分泌分析。结果，当使用Xylan作为单个碳源培养Koji模具时，鉴定出Xylan特异性SSP。这些SSP的表达分析表明，木聚糖培养物的表达显着差异。产生了SSP的破坏菌株，并进行了表型分析。结果，在破坏菌株的木聚糖分辨率中未发现显着差异。目前，我们计划创建SSP的本构表达，研究培养上清液的Xylan分辨率，并在论文中总结这些结果。我们还构建了过表达SSP的应变，并将分析SSP和酶的纯化和相互作用。将分析底物特异性SSP的破坏性菌株的表型，这些SSP也已被鉴定为其他丝状真菌（玉米芝麻叶片叶片，灰色霉菌，灰色霉菌和扁平鱼），并将其汇总在纸上。还分析了在Koji模具SSP的分析过程中发现的疏水素。当检查破坏性应变的应力抗性时，添加表面活性剂时的生长速度慢于野生型。此外，SEM观察到，疏水性的自组装膜从分生孢子表面消失。当前，我们计划创建一种表达杂素荧光蛋白融合蛋白的菌株，研究疏水性的定位，并在纸中进行总结。

项目成果

期刊论文数量（13）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Adsorption Kinetics and Self-Assembled Structures of Aspergillus oryzae Hydrophobin RolA on Hydrophobic and Charged Solid Surfaces

DOI：
10.1128/aem.02087-21
发表时间：
2022-02
期刊：
Applied and Environmental Microbiology
影响因子：
4.4
作者：
Yuki Terauchi;Megumi Nagayama;Takumi Tanaka;Hiroki Tanabe;A. Yoshimi;Kei Nanatani;H. Yabu;T. Arita;T. Higuchi;T. Kameda;Keietsu Abe
通讯作者：
Yuki Terauchi;Megumi Nagayama;Takumi Tanaka;Hiroki Tanabe;A. Yoshimi;Kei Nanatani;H. Yabu;T. Arita;T. Higuchi;T. Kameda;Keietsu Abe

黄麹菌Aspergillus oryzaeのXylan特異的なSSPsの同定と破壊株の表現型解析

米曲霉中木聚糖特异性 SSP 的鉴定和破坏菌株的表型分析