Development of anti-angiogenic compounds targeting MTA1- S100A4 interaction

开发针对 MTA1-S100A4 相互作用的抗血管生成化合物

• 批准号: 20J11378
• 负责人: 石川 瑞穂
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J11378/
• 关键词: MTA1; S100A4; 血管内皮

令和3年度は昨年度に引き続き「MTA1-S100A4複合体形成を検出するスクリーニング系の構築」から行なった。遅延していたFLAGタグを付加したヒトMTA1発現ベクターおよびHAタグを付加したヒトS100A4発現ベクターの作製に関しては、本年度初めに全種類のベクターの作製が完了し、かつその全種類のベクターにおいて目的の融合タンパクが発現することも確認した。また、このベクターを使用して行った共免疫沈降法により、MTA1はN末端側および中央部分を介してS100A4と結合していることを明らかにした。続いて、Alpha protein-protein interaction (perkin elemer社)を利用したスクリーニング系の構築に進んだが、当初予定していたベクターを導入した細胞の溶解液を使用する系では、目的のタンパク質以外のタンパク質が溶液中に多量に存在する状況になり、このことが大きな障壁となることによってMTA1-S100A4複合体の評価が困難になっていた。そこでHisタグを付加したヒトMTA1発現ベクターおよびGSTタグを付加したヒトS100A4発現ベクターを作製し、精製タンパクを用いて相互作用を評価する系への変更を行った。変更後のベクター作製、大腸菌によるタンパク発現および目的タンパクの精製がそれぞれのステップで問題ないことを確認したのち、再度Alpha protein-protein interactionでのスクリーニング系の構築を行った。最終的に、MTA1-S100A4複合体の形成を発光量で簡便に評価できるスクリーニング系の構築が完了した。

Ling and in the last year of the year, the MTA1-S100A4 complex was introduced in the last year. After the completion of this year, the whole FLAG program will be completed, and the purpose of this year will be to improve the performance of the system. The purpose of this year is to achieve the goal of making sure that the full range of information has been completed. The method of co-immunoprecipitation and MTA1 N-terminal immunoprecipitation were used in this study. The central part of the coimmunoprecipitation method was used to introduce the central part of the S100A4. Alpha protein-protein interaction (perkin elemer news agency) is used to determine whether there is a problem in the presence of a large amount of water in the solution, which is intended to be injected into the cell of the cell. The main barrier was the barrier. The MTA1-S100A4 complex was trapped. You can use the His to make sure that the GST is correct. The S100A4 is to show that the interaction is better than the interaction. In the future, you will need to make sure that you do not know how to do this. If you want to do so, you will need to make sure that you do not know if you are going to have a problem. If you want to make sure that you have a problem, you will be able to do so again. Please do so again. You will not be able to do so again. The most expensive complex, MTA1-S100A4 complex, is used to form a light quantity.

项目成果

MTA1, a metastasis-associated protein, in endothelial cells is an essential molecule for angiogenesis

MTA1 是内皮细胞中的一种转移相关蛋白，是血管生成的重要分子

• DOI: 10.3892/mmr.2021.12527
• 发表时间: 2021
• 期刊: Molecular Medicine Reports
• 影响因子: 3.4
• 作者: Ishikawa Mizuho;Osaki Mitsuhiko;Uno Narumi;Ohira Takahito;Kugoh Hiroyuki;Okada Futoshi
• 通讯作者: Okada Futoshi