Fv界面への変異導入による抗体アゴニスト活性調節方法の開発

开发通过在 Fv 界面引入突变来调节抗体激动剂活性的方法

基本信息

批准号：
20J13329
负责人：
江口晃弘
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J13329/
关键词：
EGFR シグナル伝達プロテオミクスアゴニスト増殖因子受容体 c-Met Diabody

项目摘要

増殖因子受容体は特定の増殖因子の結合により活性化してシグナルを伝達する。このシグナル伝達は組織再生や幹細胞培養に必須であるため、創薬・医療分野における重要な標的とされている。しかし天然の増殖因子はがんの亢進といったネガティブな細胞機能をも誘導するため、有用な細胞機能のみを誘導可能な人工アゴニストの開発が求められている。そこで本研究は、受容体のシグナル活性を調節可能な人工アゴニストの開発方法を樹立することを目的とする。本年度は、天然リガンドによる増殖因子受容体のシグナル活性化の分子機構を詳細に比較解析することに注力した。増殖因子受容体の一つであるEGFRは7つの天然リガンドにより活性化され、それぞれ異なる下流シグナルを誘導する。どのような分子機構によりEGFRのシグナルが変化するのかを解明することは、受容体のシグナル活性を調節可能な人工アゴニストの分子デザインの指針となる。EGFRシグナルの解析はプロテオミクスにより行った。受容体シグナルは様々なタンパク質のリン酸化修飾と一時的な相互作用によって伝達されるため、リン酸化プロテオミクス及びインテラクトミクスを採用した。実際の測定では異なるリガンドと刺激時間からなる60種類の刺激条件サンプルを用意し、その後それらのライセートを基にプロテオミクス用サンプルを調整しMS runデータを取得した。その後のデータ解析により、EGFRの活性化に伴いどのようなタンパク質がどのようなタイミングでリン酸化またはEGFRにリクルートされるかに関する膨大な定量データを取得した。プロテオミクス解析に加えて、イメージングによる受容体の細胞内取り込み過程の変化や、増殖や遊走といった細胞機能レベルでの変化に関する情報も集めている。これらの情報を統合し、受容体シグナルの可変性を司る分子機構の解明を試みた。

生长因子受体通过结合特定生长因子与发射信号的结合而激活。该信号对于组织再生和干细胞培养至关重要，因此是药物发现和医疗护理领域的重要目标。但是，自然生长因子还诱导了诸如癌症促进的负细胞功能，并且有必要开发人工激动剂，以仅诱导有用的细胞功能。因此，本研究旨在建立一种可以调节受体信号活性的人工激动剂的方法。今年，我们专注于对天然配体生长因子受体信号激活的分子机制的详细比较分析。 EGFR是生长因子受体之一，被七个天然配体激活，每个配体诱导不同的下游信号。了解改变EGFR信号的分子机制是可以调节受体信号活性的人工激动剂分子设计的指南。 EGFR信号的分析是通过蛋白质组学进行的。由于受体信号是通过磷酸化的修饰和各种蛋白质的瞬时相互作用传播的，因此使用了磷酸蛋白质组学和相互作用。在实际测量中，制备了60种由不同配体和刺激时间组成的刺激条件样品，然后根据这些裂解物进行调整蛋白质组学样品，以获得MS运行数据。随后的数据分析提供了有关哪种蛋白质被EGFR激活磷酸化或募集到EGFR的大量定量数据。除蛋白质组学分析外，还收集了有关通过成像进行受体摄取过程变化以及细胞功能水平（例如增殖和迁移）的变化的信息。通过整合这些信息，我们试图阐明控制受体信号变异性的分子机制。