標的細胞の細胞質に分子を輸送する多機能タンパク質カプセルの開発

开发将分子转运至靶细胞细胞质的多功能蛋白质胶囊

• 批准号: 20J13894
• 负责人: 小松 大和
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J13894/
• 关键词: タンパク質工学

本研究では、Aquifex aeolicus lumazine synthase(AaLS)キャプシドというタンパク質カプセルをベースとして、これに遺伝子工学的エンジニアリングを施すことにより、METカスケードを人工的に活性化させるタンパク質カプセルの開発を目的としている。METカスケードの活性化は組織再生等の細胞活動を促すことが示唆されており、人工的なMETタンパク質の活性化は再生医療につながることが期待される。本研究においては、既知のMET結合大環状ペプチドを、AaLSキャプシドの外側に位置するループに導入することで、AaLSキャプシド表面に複数のペプチドを提示することに成功した。この際、METタンパク質によるプルダウンアッセイを行うことで、キャプシド表面に提示されたペプチドがMETタンパク質への結合能を有することを実証した。また、得られたキャプシドがMETの二量体化を促進するかを、METの二量体化によって引き起こされる自己リン酸化を計測することで確かめた。また、これらの系を元にキャプシド表面へのペプチドの提示量の最適化を行い、蛍光ラベルしたキャプシドを用いてエンドソーム内への集積も確かめた。

This study aims to develop Aquifex aeolicus lumazine synthase(AaLS) for the purpose of artificial activation and development of MET protein. The activation of MET cells promotes cellular activities such as tissue regeneration, and artificial MET cells are expected to activate regenerative medicine. In this study, the known MET was successfully combined with the large ring selection, AaLS selection and the outer position of the introduction, AaLS selection and the surface selection. This is the first time that the binding energy of MET has been demonstrated. The measurement of MET's bi-quantification was carried out in the following ways: For example, if you want to optimize the amount of suggestions, you can use the system to optimize the amount of suggestions.