カテコール蛍光誘導体化反応を利用したNADP+の直接測定法の開発

开发利用儿茶酚荧光衍生反应直接测量 NADP+ 的方法

• 批准号: 20K05561
• 负责人: 柴田 孝之
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K05561/
• 关键词: NADP+; アドレナリン; カテコール酸化反応; 蛍光誘導体化反応; 生体試料; Zimmerman反応; ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド; カテコール; 臨床検査

本研究は、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（NADP+）の直接測定法の開発を目的としている。2022年度は、アドレナリンが酸化される際に、キノン体に変化されるだけでなく引き続き環化反応を起こすことを明らかにした。そこで2022年度は、アドレナリンの環化に必要な条件および環化される際の分光学的特性を評価した。NADP+がアドレナリンを酸化することは既に確認しているため、より酸化の速い過ヨウ素酸を用いて実験を行った。まず、反応に及ぼす緩衝液の種類の影響を調べた。その結果、ホウ酸緩衝液中で反応を行った場合のみ蛍光性の生成物を生じることが判明した。一方、リン酸やトリスヒドロキシメチルアミノメタンの様な一般的な緩衝液中では蛍光体は生成しなかった。また、pH 8.0付近では効率よく蛍光が得られたのに対し、pH 7.0や9.0では蛍光は著しく減少することが判明した。本反応は反応温度にも敏感であり、室温（20℃）ではほとんど反応は進行せず、37℃では最大の蛍光強度が得られた。しかし、温度を上昇させると得られる蛍光は減弱し、60℃程度の加温で蛍光は全く発しなくなった。この様に、非常に厳密な反応条件のコントロールが必要なものの、ホウ酸緩衝液を使用し37℃で反応させることで、アドレナリン特異的な環化を起こすことができ、しかもその生成物が青色蛍光を発することを見出した。この事実は、アドレナリンの酸化的閉環反応をNADP+で起こすことができれば、NADP+依存的な蛍光検出が可能になることを意味するものである。

This study は, acidification ニ コ チ ン ア ミ ド ア デ ニ ン ジ ヌ ク レ オ チ ド リ ン acid (NADP +) の direct measurement の open 発 を purpose と し て い る. 2022 annual は, ア ド レ ナ リ ン が acidification さ れ る interstate に, キ ノ に ン body - turn さ れ る だ け で な く lead き 続 き cyclic reverse 応 を up こ す こ と を Ming ら か に し た. そ こ で は, 2022 ア ド レ ナ リ ン の cyclization に な necessary conditions お よ び cyclization さ れ る interstate の points and the characteristics of optical を review 価 し た. NADP + が ア ド レ ナ リ ン を acidification す る こ と は に confirmed both し て い る た め, よ り acidification の speed ever い ヨ acid を ウ element with い て be 験 を line っ た. Youdaoplaceholder0, anti応 に and ぼす buffer <s:1> types <e:1> affect を tuning べた. そ の results, ホ ウ で in acid buffer against 応 を line っ た occasions の み 蛍 optical の products を raw じ る こ と が.at し た. One party, リ ン acid や ト リ ス ヒ ド ロ キ シ メ チ ル ア ミ ノ メ タ ン の others な で in general な buffer は 蛍 light body は generated し な か っ た. ま た, pH 8.0 paying nearly で は sharper rate よ く 蛍 が too light ら れ た の に し seaborne, pH 7.0 9.0 で や は 蛍 は there し く reduce す る こ と が.at し た. This anti 応 は anti 応 temperature に も sensitive で あ り, room temperature (20 ℃) で は ほ と ん ど anti 応 は for せ ず, 37 ℃ で は biggest の 蛍 light intensity が have ら れ た. <s:1> で蛍 <s:1>, as the temperature を rises, させると causes られる蛍 light <s:1> to weaken <e:1>, and at 60℃, <s:1> heating で蛍 light <s:1> all く emit なくなった なくなった. こ の others に, very に 厳 dense な anti 応 conditions の コ ン ト ロ ー ル が necessary な も の の, ホ ウ acid buffer を use し 37 ℃ で anti 応 さ せ る こ と で, ア ド レ ナ リ ン specific な cyclization を up こ す こ と が で き, し か も そ の products が cyan light 蛍 を 発 す る こ と を shows し た. こ の things be は, ア ド レ ナ リ ン の acidification closed-loop anti 応 を NADP + で up こ す こ と が で き れ ば, NADP + dependent な 蛍 検 out light が may に な る こ と を mean す る も の で あ る.

项目成果

中性選択的蛍光色素における蛍光波長の長波長化とpH範囲選択性の向上

中性选择性荧光染料具有更长的荧光波长和更高的 pH 范围选择性

• 发表时间: 2021
• 作者: 相澤よしの;直井美徳;須藤豊;柴田孝之
• 通讯作者: 柴田孝之

中性領域でのみ発光する新規蛍光色素の合成と蛍光特性の評価

仅在中性区发光的新型荧光染料的合成及荧光性能评价

• 发表时间: 2020
• 作者: 直井美徳;須藤豊;柴田孝之
• 通讯作者: 柴田孝之

A Facile Method for the Quantification of Urinary Uracil Concentration by a Uracil-Specific Fluorescence Derivatization Reaction

通过尿嘧啶特异性荧光衍生反应定量尿尿嘧啶浓度的简便方法

• DOI: 10.1248/cpb.c21-00221
• 发表时间: 2021
• 期刊: Chemical and Pharmaceutical Bulletin
• 影响因子: 1.7
• 作者: Shibata Takayuki;Shimamura Ryosuke;Yamamoto Yuji;Sakurai Hiroki;Fujita Junya;Yamayoshi Asako;Nemoto Toshimitsu;Kabashima Tsutomu
• 通讯作者: Kabashima Tsutomu

置換基を有する弱酸特異的蛍光ラベル化剤の骨格の探索

寻找具有取代基的弱酸特异性荧光标记剂的骨架

• 发表时间: 2020
• 作者: 山浦裕紀;柴田孝之
• 通讯作者: 柴田孝之

A Facile Method to Determine Prolidase Activity Using a Peptide-Specific Fluorometric Reaction

使用肽特异性荧光反应测定脯氨酸酶活性的简便方法

• DOI: 10.1248/cpb.c22-00467
• 发表时间: 2023
• 期刊: Chemical and Pharmaceutical Bulletin
• 影响因子: 1.7
• 作者: Tsutomu Kabashima; Nana Hamasaki;Keiko Tonooka and Takayuki Shibata
• 通讯作者: Keiko Tonooka and Takayuki Shibata