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発光ゴカイにおける新奇生物発光の分子基盤研究

发光沙蚕新型生物发光的分子基础研究

基本信息

批准号：
20K05741
负责人：
安野理恵
金额：
$ 2.75万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K05741/
关键词：
発光生物ルシフェラーゼゴカイ生物発光

项目摘要

発光ゴカイは鮮やかな青緑色（510nm）の発光液を海中に分泌する発光生物である。1950年代には、ルシフェリン・ルシフェラーゼ分子による発光機構を有することが示されたが、それ以降詳細な解析は進められていなかった。本研究では、発光ゴカイの発光分子機構を解明することを目的として、in vitroにおける発光反応の生化学的解析、ルシフェラーゼの結晶構造解析を進める。これまでにゴカイルシフェラーゼの単離、同定に成功し、生体から抽出したルシフェリン溶液と動物培養細胞で発現させたルシフェラーゼタンパク質を用いてin vitro発光系を構築している。ルシフェリン分子については分子構造の報告はあるものの、人工合成系は未だ確立されていないため、生体試料からの粗抽出物を解析に使用する。構築した発光系において、発光反応のpH依存性や温度依存性、塩濃度依存性など、ゴカイ発光反応の生化学的特性の解析を進めている。一方で、得られる発光データに不安定さがみられることから、実験系の精査とルシフェラーゼタンパク質の粗精製を検討している。また、ゴカイルシフェラーゼタンパク質の特異抗体の作成および結晶構造解析に供試するために、ルシフェラーゼタンパク質の大量調整の検討を引き続き進めた。これまで、様々な発現プロトコールの改良や可溶化タグを付加し、組換えタンパク質の細胞外分泌を試みたが効果的な分泌率向上には至っていない。そこで、細胞内または膜タンパク質に蓄積または凝集していると思われる組換えタンパク質の可溶化の検討を進めた。

Light, light, blue, blue, In the 1950s, in the 1950s, there was a general information system in the light machinery of the information system, which showed that the information was displayed and analyzed in order to improve the performance. In this study, the molecular mechanism of photoluminescence was used to understand the purpose of in vitro, the biochemical analysis of photochemical reaction, and the analysis of the results of chemical analysis. Please tell me that you are not allowed to stay away, that you are successful, and that your body is extracted from the solution, and that the cells are cultured in the solution. You can use the in vitro light system. The molecular report, the synthetic system, the raw material, the crude extract, the raw material, the crude extract, the raw material, the raw material, the crude extract, the raw material, the raw material, the crude extract, the raw material, the raw material, the crude extract, the raw material, the raw material, the crude extract, the crude extract, the crude extract. Temperature dependence, temperature dependence, pH dependence, temperature dependence On the other hand, it is necessary to know that there is no stability in the market, and that there is a problem with the quality of the system. In the first place, we did not know how to detect the specific antibodies. The results showed that the analysis was used for the purpose of testing and analyzing the data. It was found that the secretion rate of the fruit was increased from soluble to soluble, and the secretion rate of the fruit increased to the level of extracellular secretion. It is necessary to detect the concentration of lysate, intracellular membrane, membrane, agglutination, and solubility in the cell.