フリーズドライ卵子の作製技術の開発

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マウスの未受精卵から染色体（スピンドル）を含む直径0.01～0.02ミリメートルほどの「ミニ卵」を作製し、二糖類であるトレハロースを含む溶液をベースとしてフリーズドライ（凍結乾燥）を試みた。通常の顕微操作における除核操作でミニ卵を作製すると、出来上がったミニ卵はサイズが小さすぎるために操作がしにくく、ミニ卵をロスしやすくなった。そこで今回、顕微授精のICSI（卵細胞質内精子注入法）で使用されるホールディングピペットに、透明帯を除去した未受精卵の染色体（スピンドル）のある領域を吸引させて保持し、もう片方の極太インジェクションピペット（直径0.03～0.05ミリメートル）を用いて吸引されていない側の細胞質の大部分を振り子のようにカットすることによって、通常の除核操作よりも簡単にスピーディーに大きめのミニ卵を作製した。フリーズドライ用溶液に関して、作製したミニ卵を200～400 mMのトレハロース水に加えてフリーズドライすると、再加水した後のミニ卵の回収率が、用意したミニ卵の数の50%もしくはそれ以上となり、これまで試したどの候補溶液よりも高くなった。再加水時にミニ卵は円形で薄茶色に呈色しているため、見つけやすい点もこの溶液を使用する利点である。一方、この「フリーズドライミニ卵」の問題点は、そのままでは使用できないほどに固く、レシピエント卵（除核卵）に注入するためにインジェクションピペット内に吸引することが困難なことである。トレハロース水を用いること以外の方法ではフリーズドライミニ卵の再加水後の回収はほとんどできなかった。わずかながら回収できたミニ卵を除核卵に注入し、ミニ卵由来の再構築卵を賦活化させて第一卵割中期まで発生することがあったが、結果は安定せず、染色体ダメージもみられた。