フリーズドライ卵子の作製技術の開発

冻干卵母细胞生产技术的开发

• 批准号: 20K06457
• 负责人: 日下部 博一
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06457/
• 关键词: マウス; フリーズドライミニ卵; 染色体; スピンドル; ミニ卵; 再構築卵; フリーズドライ卵; 卵子; フリーズドライ

マウスの未受精卵から染色体（スピンドル）を含む直径0.01～0.02ミリメートルほどの「ミニ卵」を作製し、二糖類であるトレハロースを含む溶液をベースとしてフリーズドライ（凍結乾燥）を試みた。通常の顕微操作における除核操作でミニ卵を作製すると、出来上がったミニ卵はサイズが小さすぎるために操作がしにくく、ミニ卵をロスしやすくなった。そこで今回、顕微授精のICSI（卵細胞質内精子注入法）で使用されるホールディングピペットに、透明帯を除去した未受精卵の染色体（スピンドル）のある領域を吸引させて保持し、もう片方の極太インジェクションピペット（直径0.03～0.05ミリメートル）を用いて吸引されていない側の細胞質の大部分を振り子のようにカットすることによって、通常の除核操作よりも簡単にスピーディーに大きめのミニ卵を作製した。フリーズドライ用溶液に関して、作製したミニ卵を200～400 mMのトレハロース水に加えてフリーズドライすると、再加水した後のミニ卵の回収率が、用意したミニ卵の数の50%もしくはそれ以上となり、これまで試したどの候補溶液よりも高くなった。再加水時にミニ卵は円形で薄茶色に呈色しているため、見つけやすい点もこの溶液を使用する利点である。一方、この「フリーズドライミニ卵」の問題点は、そのままでは使用できないほどに固く、レシピエント卵（除核卵）に注入するためにインジェクションピペット内に吸引することが困難なことである。トレハロース水を用いること以外の方法ではフリーズドライミニ卵の再加水後の回収はほとんどできなかった。わずかながら回収できたミニ卵を除核卵に注入し、ミニ卵由来の再構築卵を賦活化させて第一卵割中期まで発生することがあったが、結果は安定せず、染色体ダメージもみられた。

マウスのUnfertilized egg からchromosome (スピンドル) をcontaining diameter 0.01～0.02ミリメートルほどの「Mini egg 』をManufacture, disaccharide であるトレハロースをcontaining solution をベースとしてフリーズドライ (freeze-drying) をtestみた. The usual micro-operations and denuclearization operations are the same as the ones that are made and the ones that are released areはサイズが小さすぎるためにoperation がしにくく, ミニEGをロスしやすくなった. This time, ICSI (Intracytoplasmic Sperm Injection Method) of micro-insemination is used, the use of されるホールディングピペットに, transparent bandをRemove the chromosome of the unfertilized egg (スピンドル), attract the chromosome of the unfertilized egg, maintain the chromosome, and maintain the chromosome of the unfertilized egg.ンピペット (diameter 0.03~0.05 ミリメートル) uses いて to attract most of the されていない side of the cytoplasm.のようにカットすることによって、Normal denuclearization operationよりも简単にスピーディーに大きめのミニEGを做した.フリーズドライsolution に关して, making したミニEGを 200～400のトレハロース水に加えてフリーズドライすると, したafter adding water, のミニ egg の recovery rate が, purpose したミニOVA number of 50% もしくはそれ となり, これまでtest したどの candidate solution よりも高くなった. When adding water, use the する利点である when adding water. One party, the problem point of the "フリーズドライミニEG", the use of the できないほどにsolidく, the レシピエThe ントegg (nuclear egg) is injected into the するためにインジェクションピペット内にattracting the することがdifficultyなことである.トレハロース水を Use methods other than いることではフリーズドRecycle the はほとんどできなかった after adding water.わずかながら Recycled できたミニ Egg を Denuclearized Egg に Injection し ミニ Egg Origin の Reconstructed Egg を Revive さ せ てThe first stage of egg cutting is the birth of the egg, the result is stable, and the chromosome is stable.