Study on the mechanism of sperm and embryo transport in oviduct in situ

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目的：本研究の目的は、卵子や初期胚がどのように卵管内を移動して子宮に至るのかを明らかにすることである。本年度は、排卵された卵子が、どのように卵管采（入口）を通過して膨大部（受精の場）にまで至るのかについて調査した。方法：卵管内を移動する卵子はそのままだと目視できないので、卵子（卵丘細胞は残したまま）をグルタールアルデヒド溶液で固定してからヘマトキシリンで着色することで可視化した。固定した卵子は実験直前まで4度のPBS内で冷蔵保管した。卵子の卵管内における挙動の調査は、生体につながった状態の卵管を使って行った。具体的には、排卵前（hCG投与後9～10時間）の雌マウスを吸入麻酔して卵管を腹腔外に引き出し、卵管を囲うように環流用カラーを設置してから内部にPBS（37度、0.1%BSA含）を循環させた。卵管や卵巣は透明な膜（卵巣嚢）に覆われているので、まず卵巣嚢に小さなスリットをいれ、次にガラスキャピラリーに卵子を吸入し、ガラスキャピラリーをスリットから卵巣嚢内に挿入して卵子を卵管采の上に置いた。卵子が卵管采から膨大部に到達するまでを動画に記録した。また別の実験では、卵子の移動中に卵管内に少量の墨汁を注入することで、卵子と卵管液の挙動の同時撮影も試みた。結果：卵管采に置いた卵子は数秒から十数秒かけて、卵管内へ吸い込まれるように移動した。その後卵子は、卵管の蠕動に同調するように前後に行ったりきたりを繰り返しながら膨大部方向へと進み、2分ほどで膨大部に到達した。別の実験では卵子の移動中に小量の墨汁を卵管の狭部下部（子宮に近い側）から注入したところ、卵子は、卵巣方向に向かう卵管液の流れに逆らうように膨大部に向かって移動していることが確認された。