Clarifying left-right asymmetry by imaging of cell signaling and tissue development

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従来の左右決定器官としてのノード結節 (ゼブラフィッシュKupffer's vesicle(KV)) 依存性の左右決定機構つまり、ＫＶの繊毛回転非依存性の左右決定機構について研究を行っている。KV胞の形成前からのKV構成内胚葉細胞(sox17) 陽性細胞のCa2+シグナルには大きな左右差がないことを確認できた。このために、Nodalシグナル以外のNotch、FGFシグナルによる胚体の左右差も検討したが、晃かな左右差は認めなかった。これまで、Spawの遺伝子発現がRostoral側から開始されることもある個体を発見したために、Dorsal forrunner cell (DFC)の重要性を検討してきたが、再度Spawの発現を検討したところ、KV周囲からはじまり、前方にSpawの発現が広がることが明らかになった。これは、タイムラプス顕微鏡を用いて、側方と背側から繰り返して観察することにより明らかにすることができた。本結果は、従来の繊毛依存性の左右差形成を裏付けることになったので、Dand5の遺伝子発現と局在を生体内で調べるために、Dand5-EGFPのノックイン個体の作製を開始した。さらに、Spawもこれまでは、プロモーター依存性の転写モニターリング個体のみを観察していたが、Spaw-EGFPをノックインして融合タンパク質を発現することにより、胚体内でどこまで、Spawが分泌・到達するかを可視化できる個体を作製中である。