細胞外物質による化学感覚機能機構の解明と、高機能性センサー開発への展開

2021年度ではまず、哺乳類の嗅覚受容体の匂い応答をリアルタイム計測するための、応答可視化技術の開発を行った。哺乳類嗅覚受容体の匂い応答はcAMPを測定することで定量化できるがその測定には通常、細胞の可溶化が必要でありこれまで、cAMPを匂い応答の指標としてリアルタイム計測することはできていなかった。このことは哺乳類嗅覚受容体を用いた匂いセンサー開発の大きな妨げとなっていた。本年度では、cAMPセンサーを遺伝子に組み込んだ培養細胞を作製した。この細胞に哺乳類嗅覚受容体を発現させ匂い刺激を行い、cAMP濃度変化を蛍光顕微鏡を用いてリアルタイム計測した。その結果、匂い刺激に応じた蛍光変化を計測でき、世界で初めて、cAMPを指標として嗅覚受容体の匂い応答を測定することに成功した。次にこの細胞を用い、機能解析の進んだ嗅覚受容体を発現、応答測定することで、開発した計測法の妥当性を検討した。その結果、本手法ではELISA法を用いた匂い応答測定法よりも感度良く、匂い応答を計測できることがわかった。特に従来の計測法で必要となる長時間の匂い暴露は必要とせず、生体とほぼ同様な、秒単位での匂い刺激でも応答測定が可能となり、匂いセンサーが要求する匂い濃度に対する追従性を備えていた。さらに様々な嗅覚受容体を発現させ応答解析を実施した結果、本細胞が多様な嗅覚受容体の、様々な匂い物質に対する応答を測定することに有用であることがわかった。このように様々な匂い物質を細胞実験で応答解析する環境が整ったため、多様な匂い物質に対する電気化学計測法の確立を引き続き実施した。その結果、これまで解析していた細胞外物質による酸化電流の増大効果がより表れやすい、新規化合物を見出した。さらに2020年度で検討した、哺乳類生体上皮のモデル細胞における粘液陽性細胞について、平面培養で大量に培養細胞を得ることに成功した

2021年度ではまず、哺乳類の嗅覚受容体の匂い応答をリアルタイム計測するための、応答可視化技術の開発を行った。哺乳類嗅覚受容体の匂い応答はcAMPを測定することで定量化できるがその測定には通常、細胞の可溶化が必要でありこれまで、cAMPを匂い応答の指標としてリアルタイム計測することはできていなかった。このことは哺乳類嗅覚受容体を用いた匂いセンサー開発の大きな妨げとなっていた。本年度では、cAMPセンサーを遺伝子に組み込んだ培養細胞を作製した。この細胞に哺乳類嗅覚受容体を発現させ匂い刺激を行い、cAMP濃度変化を蛍光顕微鏡を用いてリアルタイム計測した。その結果、匂い刺激に応じた蛍光変化を計測でき、世界で初めて、cAMPを指標として嗅覚受容体の匂い応答を測定することに成功した。次にこの細胞を用い、機能解析の進んだ嗅覚受容体を発現、応答測定することで、開発した計測法の妥当性を検討した。その結果、本手法ではELISA法を用いた匂い応答測定法よりも感度良く、匂い応答を計測できることがわかった。特に従来の計測法で必要となる長時間の匂い暴露は必要とせず、生体とほぼ同様な、秒単位での匂い刺激でも応答測定が可能となり、匂いセンサーが要求する匂い濃度に対する追従性を備えていた。さらに様々な嗅覚受容体を発現させ応答解析を実施した結果、本細胞が多様な嗅覚受容体の、様々な匂い物質に対する応答を測定することに有用であることがわかった。このように様々な匂い物質を細胞実験で応答解析する環境が整ったため、多様な匂い物質に対する電気化学計測法の確立を引き続き実施した。その結果、これまで解析していた細胞外物質による酸化電流の増大効果がより表れやすい、新規化合物を見出した。さらに2020年度で検討した、哺乳類生体上皮のモデル細胞における粘液陽性細胞について、平面培養で大量に培養細胞を得ることに成功した