オミックス解析を用いた歯根膜発生機構の解明と幹細胞誘導型組織再生技術への応用

利用组学分析阐明牙周膜发育机制并应用于干细胞诱导组织再生技术

• 批准号: 19H03832
• 负责人: 和田 尚久
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19H03832/
• 关键词: 歯胚; 歯根膜; 歯小嚢; 幹細胞; 歯周組織再生

歯胚発生期に着目してオミックス解析により歯根膜発生・形成に重要な特異的因子を同定、機能解析することで歯根膜発生機構の一端を解明し、さらに歯根膜発生・形成に重要な同定因子を幹細胞分化制御候補因子として歯根膜細胞への分化誘導能について検討することを目的として研究をさらに進めた。これまでに、マウス胎生18日齢の臼歯歯胚より、歯胚上皮組織、歯乳頭組織、歯小嚢組織を分離し、微量RNA-seqによる発現遺伝子の網羅的解析の結果、歯小嚢組織に高発現していた複数の因子を抽出し、各因子の発現パターンの解析および機能解析を進めた。Tmem100 は免疫組織化学染色にてE18.5歯小嚢に強い発現が認められたが、生後マウスの歯根膜には発現が弱く、象牙芽細胞、骨の辺縁に発現を強く認められた。また、E18.5歯小嚢細胞およびヒト歯根膜幹細胞株2-23において発現を確認した。2-23ならびにE18.5歯小嚢細胞を石灰化誘導培地で培養すると、Tmem100の発現が有意に上昇した。TGM2 は免疫組織化学染色にてE18.5歯小嚢に強い発現が認められ、ヒト歯根膜幹細胞株2-23の細胞質部分に発現を認めた。2-23細胞にTGM2 siRNAを導入し、WST-1 assayを行うと、TGM2 KDした細胞において細胞増殖能が有意に減少した。また、Acta2の解析を進めたところ、ヒト歯根膜幹細胞株2-23および初代ヒト歯根膜細胞において発現を確認した。歯根膜細胞においてTGF-beta刺激により1型コラーゲン、ペリオスチンおよびフィブリリンの発現が上昇したが、Acta2 siRNA により、その発現が抑制された。これらの結果から、各因子が歯の形態形成および歯根膜組織の維持に重要な役割を担っていることが示唆された。

歯 embryo 発 stage に with mesh し て オ ミ ッ ク ス parsing に よ り 歯 発 raw root membrane, forming に な specific factors を with fixed, functional analytic す る こ と で 歯 root membrane 発 raw institutions の end を interpret し, さ ら に 歯 発 raw root membrane, forming に important な with constant factor suppression alternate を stem cell factor と し て 歯 root membrane cells へ の differentiation can induce に つ い て beg す 検 る こ Youdaoplaceholder0 objective と て て to study をさらに into めた. こ れ ま で に, マ ウ ス viviparous 18 齢 の mortar 歯 歯 embryo よ り, 歯 embryo epithelial tissue, 歯 nipple organizations, small 歯 嚢 を separation し, micro RNA - seq に よ る 発 now but 伝 son の snare parsing の results, high 歯 small 嚢 organization に 発 now し て い た plural を drew し の factor, various factors の 発 now パ タ ー ン の parsing お よ び function analytical を into め た . Tmem100 は immunohistochemical staining に て E18.5 歯 small 嚢 に strong い 発 が now recognize め ら れ た が, postnatal マ ウ ス の 歯 root membrane に は 発 が weak く now, ivory bud cells, bone の 辺 try に 発 を strong く now recognize め ら れ た. Youdaoplaceholder0, E18.5歯 small capsule cells およびヒト歯 root membrane stem cell line 2-23にお て て showed を confirmation of た. 2-23 な ら び に E18.5 歯 small 嚢 cell を calcification induced the petty で cultivate す る と, Tmem100 の 発 now rising が intentionally に し た. TGM2 は immunohistochemical staining に て E18.5 歯 small 嚢 に strong い 発 が now recognize め ら れ, ヒ ト 歯 root membrane stem cell lines part 2-23 の cytoplasm に 発 を now recognize め た. 2-23 cells に TGM2 siRNA を import し assay, the WST - 1 line を う と, TGM2 KD し た cells に お い て cells raised colonization can reduce し が intentionally に た. ま た, Acta2 の parsing を into め た と こ ろ, ヒ ト 歯 root membrane dry cell line 2-23 お よ び original ヒ ト 歯 root membrane cells に お い て 発 を now confirmed し た. 歯 root membrane cells に お い て TGF - beta stimulus に よ り type 1 コ ラ ー ゲ ン, ペ リ オ ス チ ン お よ び フ ィ ブ リ リ ン の 発 now rising が し た が, Acta2 siRNA に よ り, そ の 発 now が inhibit さ れ た. こ れ ら の results か ら, each factor が 歯 の morphogenetic お よ び 歯 root membrane organization の maintain に cut を bear important な service っ て い る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

The role of ACTA2 in periodontal ligament cell stimulated with TGF-β1

ACTA2在TGF-β1刺激牙周膜细胞中的作用

• 发表时间: 2020
• 作者: Naati Fakatava;御手洗裕美;祐田明香;長谷川大学;前田英史;和田尚久
• 通讯作者: 和田尚久

TransgelinはIntegrinを介した細胞が基質への接着に関与する

Transgelin 参与整合素介导的细胞与基质的粘附

• 发表时间: 2020
• 作者: 御手洗裕美;祐田明香;Naati Fakatava;長谷川大学;前田英史;和田尚久
• 通讯作者: 和田尚久

Actin alpha 2, smooth muscle, a transforming growth factor-β1-induced factor, regulates collagen production in human periodontal ligament cells via Smad2/3 pathway

• DOI: 10.1016/j.jds.2022.08.030
• 发表时间: 2023-03-21
• 期刊: JOURNAL OF DENTAL SCIENCES
• 影响因子: 3.5
• 作者: Fakatava, Naati;Mitarai, Hiromi;Wada, Naohisa
• 通讯作者: Wada, Naohisa