覚醒・睡眠に必須な神経細胞種の発現解析による睡眠圧の分子実体の探索

通过分析觉醒和睡眠必需的神经元细胞类型的表达来寻找睡眠压力的分子实体

• 批准号: 19J00925
• 负责人: 宮竹 功一
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J00925/
• 关键词: 睡眠; 覚醒; 転写発現解析

前年度までにジフテリア毒素 (DTA)を発現するAAVを、神経細胞種特異的にCreを発現するマウスに注入する実験から、PB/PC領域のグルタミン酸作動性神経細胞が覚醒の制御に重要な役割を果たす可能性が示唆された。そこでこの神経細胞種特異的な発現解析を行うために、標的神経細胞をEGFP-rpl10aでラベルし、LMDで切り出す実験系を確立した。次にこの系を利用してPB/PCの神経細胞種特異的な発現解析を行った。具体的には上記で確立した方法で、断眠を施したマウスとコントロールマウスのPB/PC領域のグルタミン酸作動性神経細胞のみを個体ごとに１００細胞回収し、RNA-Seq解析により遺伝子発現解析を行った。有意に変化した遺伝子群に対してGO解析を行った結果、断眠によって減少した遺伝子群にはカルシウムイオン輸送に関わる遺伝子群等が存在する一方で、断眠によって上昇した遺伝子群には免疫応答に関わる遺伝子群等が存在することが分かった。またさらに１細胞レベルでの解析を行うために、回収方法等の検討を行った結果、LMDで回収した1神経細胞からでも高品質なRNA-seq libraryを合成できる方法を確立することができた。一方、睡眠に必須な神経細胞種を特定するために、ノンレム睡眠への導入を制御すると報告されているPOA領域の神経細胞の除去実験を行った。具体的にはTEV proteaseに切断を受けるよう改変したprocaspase-3とTEV proteaseの２つが発現するAAVを用いてPOA領域の神経細胞除去を行い睡眠覚醒に及ぼす影響を検証した結果、睡眠覚醒が断片化することがわかった。本研究成果は睡眠および断眠が個体に及ぼす分子的変化の実態の解明につながる可能性がある。

Previous year's Toxin (DTA)を発appearsするAAVを、神経 cell species-specificにCreを発appearsするマウスに injectsする実験から、P In the field of B/PC, the active nerve cells of the B/PC field are active and the control is important. The specific anaphylaxis analysis of そこでこの神経cell species-specific を行うために, the target genus cell をEGFP-rpl10a でラベルし, and the LMD でcutり出す実 line were established. The system utilizes the cell species-specific analysis of PB/PC. Specifically, the method for establishing the method is mentioned above, and the method of breaking sleep is used in the PB/PC field. Acid-activated neuroblastoma cells are collected individually and 100 cells are collected, and RNA-Seq analysis is carried out. Intentionally change the result of the GO analysis of the remaining subgroups, and reduce the sleep of the remaining subgroups of the remaining subgroups. The remaining 伝subgroups and so on exist and the remaining 伝subgroups and so on do not exist. High-quality naRNA-seq LibraryをSynthesis methodをEstablishmentすることができた. On the one hand, sleep is necessary and the god's cell species is specific, and no sleep is introducedをcontrolled すると report されているPOA field の神経cell のremoval実験を行った. Specific にはTEV protease をReceived けるよう change 変したprocaspase-3とTEV protease の２ つが発成するAAVを用いてPOA domainの神経CROE The result of sleep awakening and its influence on syndrome, and the fragmentation of sleep awakening are the result. The results of this study reveal the possibility of individual and individual sleep changes and the changing state of molecules.