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ウイルスベクターを用いた耐塩性Ｖｉｇｎａ属野生種の遺伝子機能解析基盤の構築

病毒载体耐盐野生豇豆属基因功能分析平台的构建

基本信息

批准号：
19J01293
负责人：
有賀裕剛
金额：
$ 3.08万
依托单位：
National Agriculture and Food Research Organization
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J01293/
关键词：
耐塩性ウイルスベクター

项目摘要

本研究推進の上で最も重要となる耐塩性Vigna属野生種に感染するウイルスベクターの開発に着手した。ヒナアズキ (V.riukiuensis) およびハマササゲ (V.marina) の自生地である沖縄県宮古島に渡り、当該植物をサンプリングした。収集サンプルから抽出した全RNAを用いてRNA-seqを行なった結果、Cucumber mosaic virus (CMV) およびBean common mosaic virus (BCMV) が検出された。特にCMVに関しては他の植物種におけるウイルスベクターとしての利用例が多く、耐塩性Vigna属野生種においても有効なウイルスベクターが構築できると考えられた。そこで検出されたCMVをVigCMVと命名し、その完全長塩基配列を決定した。CMVは3本のRNAからゲノムが成り立つウイルスである。申請者は3本の完全長cDNAをそれぞれクローニングし、プラスミド内の植物恒常発現用プロモーターの下流に組込んだ。また、VigCMVのRNA2およびRNA3の塩基配列を改変し、外来DNA断片を組込むための制限酵素サイトを付加し、VigCMV-REと命名した。作成したプラスミドDNAをアグロバクテリウムに形質転換し、アグロバクテリウム懸濁液による遺伝子一過的発現システムを利用したウイルス感染系を構築した。構築したシステムをタバコ (Nicotiana benthamiana) に供した結果、VigCMVおよびVigCMV-REはいずれもタバコにおいて全身感染した。一方で、同システムをヒナアズキおよびハマササゲに供したところアグロバクテリウム懸濁液が葉に浸潤せず、VigCMVの感染が認められなかった。そこで現在は、タバコで増幅したVigCMVおよびVigCMV-REを精製し、ヒナアズキおよびハマササゲに機械接種するシステムの構築を進めている。

This study advances the development of the most important resistance to infection by wild species of Vigna.ヒナアズキ (V.riukiuensis) およびハマササゲ (V.marina) の自生地である冲縄県宫古岛に渡り、当该植物をサンプリングした。The results of RNA-seq were as follows: Cucumber mosaic virus (CMV) and Bean common mosaic virus (BCMV). In particular, CMV is related to other plant species, such as the use of multiple, resistant Vigna wild species. The name of VigCMV is determined by the full length of the CMV. CMV 3 RNA The applicant submitted a complete cDNA sequence of 3 genes to the plant for constant expression in the plant. The gene sequence of VigCMV RNA2 and 3 was changed. The foreign DNA fragment was assembled and the restriction enzyme was added. VigCMV was named. To construct a novel infection system by using DNA as a vector for the development of a novel DNA sequence. The construction of the first class (Nicotiana benthamiana) for the results, VigCMV and VigCMV-RE for the first class The virus was found to be infected with the virus, and the virus was found to be infected with it. In addition, VigCMV and VigCMV-RE have been refined, and the construction of mechanical inoculation systems has been advanced.