ネムリユスリカの乾燥無代謝休眠を司る新規転写因子の同定

摇摇蚊中控制干燥代谢休眠的新型转录因子的鉴定

• 批准号: 19J12030
• 负责人: 徳本 翔子
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J12030/
• 关键词: 乾燥耐性

昨年度は、ネムリユスリカの最小プロモーターについて論文化、および最小プロモーターを用いたレポーターベクターをPv11細胞へ導入することで、STARR-seqが行えるかを検討した。Pv11細胞の乾燥処理過程では、heat shock factor 1（HSF1）の発現が上昇し、乾燥耐性に寄与する遺伝子群のプロモーター上のheat shock element（HSE）に結合することで、転写促進を行うことがわかっている。そこで、HSE、最小プロモーターおよびルシフェラーゼを組み込んだ、レポーターベクターを作成した。このベクターをPv11細胞へ導入後、乾燥処理を行い、ルシフェラーゼ活性が上昇するかを検討した。その結果、レポーターベクターを導入する際のエレクトロポーレーションのダメージで、HSF1が活性化し、乾燥処理前からルシフェラーゼの活性が上がってしまった。一過的にレポーターベクター群を導入して行う、従来のSTARR-seqがPv11細胞では適していないことが判明した。したがってSTARR-seqをPv11細胞で行うため、レポーターの発現ユニットの部分を、ゲノム上にあらかじめ挿入したPv11細胞を準備する必要があることが判明した。そこで、乾燥耐性に影響を与えないゲノムの箇所（Safe harbor: SH）を探し出し、そこに発現ユニットを挿入することにした。GFPの発現ユニットがゲノムにランダムに挿入された、かつ、乾燥耐性能を維持しているPv11細胞を用いて、GFPの発現ユニットが挿入されている箇所の特定を行った。その結果、4箇所のSH候補を得た。このSH候補の1箇所に対して、実際にSHとして機能するかを検討した。その結果、SHとして利用できることがわかり、Pv11細胞におけるSHを同定した。

Yesterday annual は, ネ ム リ ユ ス リ カ の minimum プ ロ モ ー タ ー に つ い て theory of culture, お よ び minimum プ ロ モ ー タ ー を with い た レ ポ ー タ ー ベ ク タ ー を Pv11 cells へ import す る こ と で, STARR - seq が line え る か を beg し 検 た. の dry 処 Pv11 cells during processing で は, heat shock factor 1 (HSF1) の 発 now rising が し, dry patience に send す る heritage 伝 subgroup の プ ロ モ ー タ ー の on heat shock element (HSE) に す る こ と で, planning to write promote を う こ と が わ か っ て い る. そ こ で, HSE, minimum プ ロ モ ー タ ー お よ び ル シ フ ェ ラ ー ゼ を group み 込 ん だ, レ ポ ー タ ー ベ ク タ ー を made し た. こ の ベ ク タ ー を へ Pv11 cells after import, dry line を い 処 and ル シ フ ェ ラ ー ゼ active が rise す る か を beg し 検 た. そ の results, レ ポ ー タ ー ベ ク タ ー を import す る interstate の エ レ ク ト ロ ポ ー レ ー シ ョ ン の ダ メ ー ジ で, HSF1 が activeness し before, dry 処 か ら ル シ フ ェ ラ ー ゼ の on active が が っ て し ま っ た. One of に レ ポ ー タ ー ベ ク タ ー group を import し て う, 従 to の STARR - seq が Pv11 cells で は optimum し て い な い こ と が.at し た. し た が っ て STARR - seq を Pv11 cell line で う た め, レ ポ ー タ ー の 発 now ユ ニ ッ ト の part を, ゲ ノ ム on に あ ら か じ め scions into し た Pv11 cells を prepare す る necessary が あ る こ と が.at し た. そ こ で, dry patience に influence を and え な い ゲ ノ ム の a by (Safe harbor: SH) を agent し し, そ こ に 発 now ユ ニ ッ ト を scions into す る こ と に し た. GFP の 発 now ユ ニ ッ ト が ゲ ノ ム に ラ ン ダ ム に scions into さ れ た, か つ, dry patient sustained を し て い る Pv11 cells を using い て, GFP の 発 now ユ ニ ッ ト が scions into さ れ て い る の by a definite line を っ た. Youdaoplaceholder0 そ result, 4 of the SH candidates を get た. The <s:1> <s:1> SH reserve will have one に to fight against the て and にSHと て functions to する と を検 to discuss た. そ の results, SH と し て using で き る こ と が わ か り, Pv11 cell に お け る SH を with fixed し た.

项目成果

Hsfの選択的スプライシングによるネムリユスリカ特異的な乾燥耐性制御機構の解明

阐明 Hsf 选择性剪接控制 Hsf 特异性干燥耐受性的机制

• 发表时间: 2019
• 作者: 徳本翔子;宮田佑吾;Ruslan Deviatiiarov;Richard Cornette;Oleg Gusev;黄川田隆洋
• 通讯作者: 黄川田隆洋

Low melting point agarose (LMPA)-immobilization method to improve functional assay of olfactory receptors in Sf9 cells.

低熔点琼脂糖 (LMPA) 固定方法可改善 Sf9 细胞中嗅觉受体的功能测定。

• 发表时间: 2020
• 期刊: Cryobiology and Cryotechnology.
• 作者: Hiroto Fuse;Yugo Miyata;Shoko Tokumoto;Richard Cornette;Takahiro Kikawada
• 通讯作者: Takahiro Kikawada

New group of transmembrane proteins associated with desiccation tolerance in the anhydrobiotic midge Polypedilum vanderplanki

一组新的跨膜蛋白与脱水蠓 Polypedilum vanderplanki 的干燥耐受性相关

• DOI: 10.1038/s41598-020-68330-6
• 发表时间: 2020
• 期刊: Scientific Reports
• 影响因子: 4.6
• 作者: Voronina Taisiya A.;Nesmelov Alexander A.;Kondratyeva Sabina A.;Deviatiiarov Ruslan M.;Miyata Yugo;Tokumoto Shoko;Cornette Richard;Gusev Oleg A.;Kikawada Takahiro;Shagimardanova Elena I.
• 通讯作者: Shagimardanova Elena I.

乾眠できる昆虫ネムリユスリカの放射線耐

能睡觉的昆虫的辐射抗性

• 发表时间: 2019
• 期刊: 放射線生物研究
• 作者: 徳本翔子;宮田佑吾;黄川田隆洋
• 通讯作者: 黄川田隆洋

Kazan Federal University(ロシア連邦)

喀山联邦大学（俄罗斯联邦）