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内在性脂肪酸不飽和化酵素の三機能化による植物油で育つ海産魚新品種の作出

通过三功能化内源性脂肪酸去饱和酶创建以植物油生长的新海洋鱼类品种

基本信息

批准号：
19J14936
负责人：
松下芳之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo University of Marine Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度はまず、ササウシノシタ不飽和化酵素遺伝子におけるゲノム編集の成否を検出する系の構築を行った。これにより、ゲノム編集領域に設計したプライマーと、鋳型とプライマーのわずかなミスマッチを識別可能なDNA合成酵素を用いることにより、野生型またはゲノム編集型DNAをそれぞれ効率よく特異的に増幅することが可能になった。次に、昨年度に設計したgRNAおよびドナーDNAを様々な組合せで使用し、ササウシノシタのCRISPR/Cas9システム顕微注入胚2652個を作成し、これらを着底するまで飼育した。その後、死亡個体の魚体と生存個体の尾鰭断片からゲノムDNAを抽出し、先の検出系に供した結果、複数の死亡個体と１尾の生残個体において、ゲノム編集型特異的な増幅産物が検出された。この産物をクローニングし、塩基配列を決定したところ、目的の塩基置換が正確に導入されていることが確認されたことから、改変型不飽和化酵素遺伝子をもつササウシノシタのファウンダー個体を作出することに成功したことが明らかになった。また、昨年度に館山ステーションへ輸送し飼育を開始したササウシノシタ野生型集団の一部に対し、日長・水温コントロールによる人為催熟を行うことにより、本来の産卵期外に受精卵を生産することに成功した。さらに、ワムシやアルテミアの培養餌料を検討し、これらを与えて飼育した仔稚魚の粗脂肪含量や脂肪酸組成を分析する実験系の動作をゼブラフィッシュを用いて確認した。本年度に作出されたファウンダー個体は年度内に成熟可能なサイズに達しておらず、F1世代の作出やその給餌試験には至らなかったものの、これを実際に作出し、養成・催熟・系統化したのちに表現型を解析するための技術基盤が整備された。

This year, we will continue to develop a system for the preparation and development of unsaturated enzyme genes. This is the first time that we have ever seen a DNA synthesis enzyme. In the past year, 2652 micro-injected embryos were created and cultured in the CRISPR/Cas9 system designed for use in combination with DNA. DNA was extracted from the tail fin fragments of the dead and surviving individuals, and the amplified products of the previous detection system were found in a number of dead and surviving individuals. The product is selected from the group consisting of the target group and the target group. The target group is selected from the group consisting of the target group and the target group. In the past year, some wild-type populations have been successfully matured due to temperature changes, and some of them have been successfully produced outside the spawning period. In addition, the analysis of crude fat content and fatty acid composition of fish larvae was carried out to confirm the action of fish larvae. This year, the company made a technical foundation for the development, maturation, and systematization of the company's products.

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Visualization and tracking of live type a spermatogonia using a fluorescence-conjugated antibody in Salmo species

使用荧光偶联抗体对 Salmo 物种的活 A 型精原细胞进行可视化和跟踪

DOI：
10.1016/j.aquaculture.2020.736096
发表时间：
2021
期刊：
Aquaculture
影响因子：
4.5
作者：
Ichida Kensuke;Matsushita Yoshiyuki;Amano Yuichi;Miwa Misako;Nagasawa Kazue;Hayashi Makoto;Mizutani Hanaka;Takahashi Momo;Boonanuntanasarn Surintorn;Yoshizaki Goro
通讯作者：
Yoshizaki Goro

脂肪酸不飽和化酵素遺伝子2ノックアウトゼブラフィッシュの表現型解析

脂肪酸去饱和酶基因2敲除斑马鱼的表型分析