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Genetic basis of regulating home-cage activity in mice

调节小鼠家笼活动的遗传基础

基本信息

批准号：
19J15360
负责人：
上田奈央子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The Graduate University for Advanced Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J15360/
关键词：
Arl8b リソソーム活動量自発行動飢餓状態 CRISPR/Cas9 Gタンパク質

项目摘要

本年度も昨年度に引き続き、ADP ribosylation factor-like 8B (Arl8b)遺伝子について、すでにCRISPR/Cas9システムを用いたゲノム編集により得られたArl8bのノックアウトマウス(Arl8b-KO)、キネシンなど他のタンパク質と結合するエフェクター領域に近い３アミノ酸をコードする９塩基を欠損したArl8b遺伝子変異マウス(Arl8b-Δ9)、Constitutively active型(Arl8b-Q75L）およびDominant negative型（Arl8b-T34N）のマウスから単離した細胞培養系の解析およびそれらの改変マウスの行動解析を行った。ARL8B は主にリソソームに局在する低分子量Gタンパク質であり、リソソームの細胞末端への移動に必須のタンパク質である事がわかっている。リソソームは細胞の栄養状態の感知に重要な役割を担っており、細胞内の栄養状態によりリソソームの局在が変化する事がわかっている。そこで、ARL8Bが、細胞の栄養状態によるリソソームの局在変化に関与しているのかを検証した。その結果、野生型由来のマウス胎児線維芽細胞（MEF）と４つの変異マウス由来のMEFの間で、通常状態の培養条件下でのリソソームの局在に大きな差は見られなかったが、飢餓状態から富栄養状態に戻すと、Arl8b-Δ9マウス由来とArl8b-T34Nマウス由来のMEFでは、細胞の末端へのリソソームの移動が遅れることを見出した。次に、ARL8Bのタンパク質活性と自発行動の関係性を調べるため、ホームケージ活動性テストをはじめとする自発行動を測定する行動実験を行ったところ、Arl8bーT34Nマウスは、ホームケージ活動量テストにおいて高い活動量を示す傾向が見られたが、Arl8bーQ75Lマウスは特に異常を示さなかった。以上のように今年度は、ARL8Bの遺伝子編集マウスを複数系統作出し、初代培養細胞でのリソソームの局在にARL8Bが関与すること、特に飢餓からの回復期にARL8Bが重要であることを明らかにした。

This year's review of CRISPR/Cas9 is based on the review of the CRISPR/Cas9 system, which was conducted last year, and ADP ribosylation factor-like 8B (Arl 8b).(Arl8b-KO), The analysis of cell culture lines of Arl8b-Δ9, Arl 8b-Q75L and Arl 8b-T34N was carried out. ARL8B is a low molecular weight protein that is essential for cell terminal migration. The cell's maintenance status is important to the perception of the system, and the cell's maintenance status is important to the development of the system. ARL8B is the most important factor in the development of cell culture. The results showed that wild type MEF derived from Arl 8b-Δ 9 and Arl 8b-T34N derived from MEF, and the terminal MEF derived from Arl 8b-Δ 9 and Arl 8b-T34N derived from MEF, and the terminal MEF derived from Arl 8b-Δ 9 and Arl 8b-T34N derived from MEF, and the terminal MEF derived from Arl8b-Δ9 and Arl 8b-T34N derived from Arl8b-Δ9 and Arl 8b-T34N derived from MEF, and the terminal MEF derived from Arl 8b-T34N derived from Arl 8b-T34N derived from Arl 8b-Δ 9 and Arl 8b-T34N derived from MEF. ARL8B has a high activity level and a low activity level. ARL8B gene repertoire is important for the development of multiple systems, and for the recovery of ARL8B cells in primary culture.