NTCP吸着後のB型肝炎ウイルス細胞進入機構の解析

NTCP吸附后乙型肝炎病毒进入细胞机制分析

• 批准号: 19J21455
• 负责人: 佐宗 若奈
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J21455/
• 关键词: B型肝炎ウイルス; HBV; NTCP; 細胞侵入; Gタンパク質共役受容体; entry; EGFR; GPCR

これまでの研究により見出されたG蛋白質共役受容体(GPR)はsodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP)の細胞内局在を制御しており、B型肝炎ウイルス (HBV)はこの制御機構を利用して細胞進入している可能性が示唆された。GPRのノックダウンは、NTCPを介したHBVの細胞吸着を低下させたため、細胞膜上のNTCP発現量を検出すると、GPRのノックダウンによって細胞膜上のNTCP発現が低下していた。このときNTCPの細胞内局在を免疫蛍光法によって観察すると、通常は細胞膜上に集積するNTCPが、GPRノックダウン細胞では細胞内に顆粒状になって局在していた。NTCPの分解を阻害するbafilomycin A1を処理すると、通常 細胞膜上に局在するNTCPがGPRノックダウンにより細胞内へ局在変化する様子がより顕著に観察された。一方、GPRを過剰発現させた細胞では、細胞表面のNTCP発現が増加し、HBV感染も1.5倍に増加した。これら結果より、GPRはNTCPの局在を制御することで細胞のHBV感染感受性を制御することが示唆された。これまでGPRの生理活性リガンドがGPRに結合すると下流シグナルを活性化することが示されている。GPR生理活性リガンドを細胞に処理すると、HBV感染の増加が認められた。このときNTCP依存的に結合するpreS1-probeの細胞吸着が増加していた。つまりNTCPの局在は、GPRの下流シグナルの活性により制御される可能性が考えられた。これら研究成果を足がかりとし、今後さらにウイルスの細胞進入制御メカニズムの解析が進めば、ウイルスの増殖様式や感染感受性決定機序の理解だけでなく、宿主因子の新しい生理機能の解明や、新規の抗ウイルス戦略の開発にも繋がると期待される。

先前的研究表明，G蛋白偶联受体（GPRS）调节了黄胆磷酸钠共转运多肽（NTCPS）的亚细胞定位，这表明乙型肝炎病毒（HBV）可能使用这种调节机制进入细胞。 GPR敲低通过NTCP降低了HBV的细胞吸附，当在细胞膜上检测到NTCP表达水平时，GPR的敲低降低了细胞膜上NTCP的表达。此时，当通过免疫荧光观察到通常积聚在细胞膜上的NTCP的NTCP的亚细胞定位时，该NTCP位于GPR敲低细胞中的细胞颗粒中。当Bafilomycin A1抑制NTCP降解时，通常将NTCP定位在细胞膜上的NTCP会因GPR敲低而改变在细胞中的NTCP。另一方面，在过表达GPR的细胞中，细胞表面上的NTCP表达增加，HBV感染也增加了1.5倍。这些结果表明，GPR通过控制NTCP的定位来调节细胞中HBV感染的敏感性。到目前为止，已经表明，GPR的生物活性配体与GPR结合时会激活下游信号。用GPR生物活性配体的细胞治疗显示HBV感染的增加。目前，以NTCP依赖性方式结合的PRES1探针的细胞吸附增加了。换句话说，人们认为NTCP的定位可以通过GPR下游信号的活性来调节。希望将这些研究结果作为垫脚石，希望将来对病毒细胞进入控制机制的机制进一步分析，不仅会理解确定感染易感性的病毒的增殖模式和机制，而且还可以理解宿主因素的新生理功能以及新的抗病毒策略的新生理功能。

项目成果

MAX BioPharma(米国)

MAX BioPharma（美国）

Should a viral genome stay in the host cell or leave? A quantitative dynamics study of how hepatitis C virus deals with this dilemma

• DOI: 10.1371/journal.pbio.3000562
• 发表时间: 2020-07-01
• 期刊: PLOS BIOLOGY
• 影响因子: 9.8
• 作者: Iwanami, Shoya;Kitagawa, Kosaku;Watashi, Koichi
• 通讯作者: Watashi, Koichi

University of Oxford(英国)

牛津大学（英国）

Yonsei University(韓国)

延世大学（韩国）

B型肝炎ウイルス侵入を制御するGタンパク質受容体の同定と作用機序解析

控制乙型肝炎病毒侵入的G蛋白受体的鉴定及机制分析

• 发表时间: 2019
• 作者: Saso W;Iwamoto M;Muramatsu M;Matano T;Watashi K
• 通讯作者: Watashi K