シアノバクテリアのパートナースイッチング制御系による環境応答機構の解明

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これまでにPmgAとSsr1600について、in vitroでの相互作用解析、および過剰発現株と破壊株の表現型解析を行ってきたが、Ssr1600のリン酸化状態を検出する方法を確立していなかったため、in vivoにおいてPmgAがSsr1600をリン酸化することを示せていなかった。令和４年度はPhos-tag PAGEの泳動条件を検討することにより、リン酸化型・脱リン酸化型のSsr1600の分離に成功した。破壊株・過剰発現株セットについてPhos-tag PAGE後にSsr1600をウェスタン検出したところ、いずれの株でも脱リン酸化型のSsr1600が検出されないこと、キナーゼであるPmgAの過剰発現株ではリン酸化型のSsr1600の蓄積量が増えることが明らかになった。つまり、Ssr1600はリン酸化型でのみ細胞内に安定に蓄積し、その蓄積量はPmgAによるリン酸化活性により制御されている可能性が示された。この結果を受けて、Ssr1600の脱リン酸化に働くパートナースイッチングホスファターゼの同定に着手し、Bacterial two hybrid法を用いて候補の絞り込みを行った。