薬物代謝酵素シトクロムP450の性特異的制御におけるmicroRNAの役割

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薬物代謝酵素は体内において薬物や毒物など様々な化学物質の構造変換を担い、薬理作用や有害作用の発現やその程度に影響を及ぼす酵素である。その活性には雌雄差が存在する。本研究は薬物代謝酵素の活性に雌雄差が生じる原因を明らかにし、その変動に起因する生体影響の解明を目的としている。本年度もマウスを用い肝臓においてメス特異的に発現するCyp3a41, 3a44遺伝子の解析を進めた。Cyp3a遺伝子発現に性差が生じる一因としてmicroRNAに注目し、令和3年度のデータベース検索により性差に関与する可能性のあるmicroRNAが複数候補に挙がった。それらには直接CYP3A mRNAを標的にするものとCyp3a遺伝子発現の調節に関わる転写因子HNF4αを標的にするものが含まれた。そこで機能のレベルでそれらによる調節を解析するため、レポーター遺伝子アッセイを利用した評価系と安定発現細胞株を利用した評価系の構築を進めた。前者はpmirGLO dual-luciferase miRNA target expression vector を用いレポーター遺伝子アッセイ用プラスミドの構築を行った。CYP3A41, 3A44 mRNA解析用として3’ 非翻訳領域全長を含むプラスミドを構築した。HNF4α mRNA解析用には６種類の異なる範囲の3’非翻訳領域を含むレポータープラスミドを構築した。今後それらのプラスミドを用い、mRNA上の標的配列並びに機能的なmicroRNAの同定を進める。後者の評価系を作製するためpTarget mammalian expression vector を利用しCYP3A41および3A44 mRNAを発現させるプラスミドを構築した。プラスミドはそれぞれについて3’ 非翻訳領域を含むものと含まないものを作製した。今後培養細胞にそれらを導入し安定発現株を樹立する。