培養脂腺細胞の分泌膜小胞セボゾームの生成と周辺細胞への脂質供給機構

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脂腺細胞は、スクアレンなどの脂質を合成し、皮脂として皮膚表面に分泌する。我々は、ラットの脂腺細胞を培養したところ、脂質顆粒を含む膜小胞を活発に生成・分泌することを発見して、同膜小胞を「セボゾーム」と命名した(Endocrinology 2005年)。これまでにセボゾームはリサイクリングおよび、早期-後期エンドソーム、リソソーム、脂質ラフトなどを含有する新型の複合膜系であること、セボゾームはスクアレンやヒストンを濃縮しており、保湿機能に加え、抗菌活性を持つことが示唆された。セボゾームの分泌形式を解析するため、今回、セボゾーム分泌中の脂腺細胞の透過型電子顕微鏡による解析を試みた。【方法】初代培養の脂腺細胞はEGF添加D'MEMで培養維持した。セボゾーム分泌中の脂腺細胞をカバーガラスに播種し、数日培養しセボゾーム生成を確認後、冷グルタールアルデヒド2.5%緩衝液で固定した。定法通り処理を進め、透過型電子顕微鏡で観察した。【結果】試料作製の過程で樹脂包埋作業時にカバーガラスから細胞が剥がれず多くの試料が損傷し、良い条件で観察できる試料の作製が困難であった。かろうじて観察できた部分も試料作製時の固定、包埋などによる損傷があり、これまでに得ていた生細胞での蛍光染色観察結果との乖離が見られ、アーチファクトの影響が考えられた。【結論】透過型電子顕微鏡のための良好な試料作製が困難であったため、セボゾーム分泌中の培養脂腺細胞の十分な観察は今回はできなかった。脂腺細胞は他の一般的な培養細胞よりも脂質合成・蓄積能に富み、セボゾームは細胞外に突出した膜構造であるため、固定や包埋などの操作による損傷を受けやすく、試料作製を困難にした可能性がある。セボゾーム観察に適した試料作製条件の更なる検討が必要と考えられた。