子宮内膜細胞診用液状検体の遺伝子検査を用いた漿液性腺癌検診の確立

本研究の目的は、①TP53の遺伝子変異検出の単独で漿液性腺癌を診断することでコストを低減②子宮内膜細胞診液状検体を使用することで、漿液性腺癌診断の感度・特異度を改善③マイクロRNA検査で遊離DNA検出不能検体や前癌病変を予測できるかを明らかにすることである。癌だけでなく前癌病変をも診断し、単一の遺伝子検査(TP53変異)のみで診断でき、検査のための新たな装置や侵襲を必要としないことが本研究の独自性である。昨年度は、細胞診用液状検体の採取・保存の追加と、細胞診用液状検体からの遊離DNAの抽出・PCRによる増幅・サンガーシーケンスによるTP53遺伝子変異の検出のパイロットスタディを行い、細胞診液状検体の溶媒であるTACAS GYN Vialに融解したDNAが、本実験系で抽出・PCR可能であること、子宮体癌・卵巣癌の重複癌症例のTP53遺伝子変異のターゲットシーケンス用の16か所のプライマー（Forshewら. Sci Transl Med. 2012）を行い通常のPCRを施行した。25 cycleにて１か所のプライマーを除き、PCR産物が確認され、サンガーシーケンスを行った結果、１か所の病的バリアント（rs483352695）、１か所の良性欠失（rs587782769）、２か所のイントロンバリアント（rs1642785, rs59758982）をみとめた。TP53変異のポジティブコントロールとして使用できることを確認した。昨年度、漿液性癌に加えRRSOにより見つかったSTICやSTIL症例を追加し、合計9症例が集まったが、本年度は０症例であったため、キットの検体数に達したためシーケンスを予定している。

本研究の目的は、①TP53の遺伝子変異検出の単独で漿液性腺癌を診断することでコストを低減②子宮内膜細胞診液状検体を使用することで、漿液性腺癌診断の感度・特異度を改善③マイクロRNA検査で遊離DNA検出不能検体や前癌病変を予測できるかを明らかにすることである。癌だけでなく前癌病変をも診断し、単一の遺伝子検査(TP53変異)のみで診断でき、検査のための新たな装置や侵襲を必要としないことが本研究の独自性である。昨年度は、細胞診用液状検体の採取・保存の追加と、細胞診用液状検体からの遊離DNAの抽出・PCRによる増幅・サンガーシーケンスによるTP53遺伝子変異の検出のパイロットスタディを行い、細胞診液状検体の溶媒であるTACAS GYN Vialに融解したDNAが、本実験系で抽出・PCR可能であること、子宮体癌・卵巣癌の重複癌症例のTP53遺伝子変異のターゲットシーケンス用の16か所のプライマー（Forshewら. Sci Transl Med. 2012）を行い通常のPCRを施行した。25 cycleにて１か所のプライマーを除き、PCR産物が確認され、サンガーシーケンスを行った結果、１か所の病的バリアント（rs483352695）、１か所の良性欠失（rs587782769）、２か所のイントロンバリアント（rs1642785, rs59758982）をみとめた。TP53変異のポジティブコントロールとして使用できることを確認した。昨年度、漿液性癌に加えRRSOにより見つかったSTICやSTIL症例を追加し、合計9症例が集まったが、本年度は０症例であったため、キットの検体数に達したためシーケンスを予定している。