白金製剤による未成熟卵子の成熟・分裂能への影響とDNA２本鎖架橋の修復機能の解明

阐明铂制剂对未成熟卵的成熟和分裂能力以及DNA双链交联修复功能的影响

• 批准号: 22K09589
• 负责人: 佐藤 敏治
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09589/
• 关键词: 白金製剤; 未成熟卵子; アルキル化剤; DNA架橋修復; micro RNA; ヒト未受精卵

卵巣毒性の機序として①直接アポトーシスおよび/またはオートファジー関連経路を活性化するDNA二本鎖切断（DSB）の誘導②間接的に虚血、壊死、または炎症を介して微小血管と間質損傷によって原始卵胞の枯渇を引き起こす③「燃え尽きburnout」効果と呼ばれる3番目の仮説がある。抗がん剤による卵細胞への毒性は主に間接的なメカニズム（栄養する顆粒膜細胞や間質への損傷、活性化による卵胞の枯渇）が主であり、直接的なメカニズムは証明されていない。パクリタキセルとカルボプラチンを使用後の摘出卵巣を使用し、カルボプラチンを含む白金製剤の直接的な細胞損傷のメカニズムであるDNA鎖間架橋が減数分裂中の卵細胞に形成されるか検討した。2022年度は卵子の採取および体外培養によるライブイメージングを行った。卵子の採取は、摘出卵巣を速やかに研究室に運び、19ゲージの針を用いて卵胞液が存在しそうな部位を片側の卵巣あたり15か所程度を穿刺し、顕微鏡下で卵胞液内から卵丘細胞に覆われた未熟な卵子を探し回収した後、未成熟卵子の体外培養を行った。得られた卵子は20% Systemic Serum Substituteと75 mIU/mL recombinant follicle stimulating hormoneを含んだM199 メディウム(Gibco Labs, Grand Island, NY)内で行い培養器内で24時間培養し、卵丘細胞を除去した後に顕微鏡下に極体の放出の有無を確認した。極体の放出が確認されMⅠ期の卵子が得られれば成熟能は良好と判定した。2023年度以降は症例数の蓄積と、DNA架橋修復遺伝子の変化の評価を体外培養液中のエクソームの回収しmiR-301とmiR-409-3pの定量評価し、これらmicroRNAの発現が成熟の各ステージでどのように変化するか定量比較し、DNA修復のタイミングの仮説と一致するか検討する。

The mechanism of oocyte toxicity is: (1) direct activation of DNA duplex pathway (DSB);(2) indirect activation of blood deficiency, death, inflammation;(3) initiation of primitive oocyte apoptosis; and (4) induction of DNA duplex pathway (DSB). The toxicity of anti-oocyte is mainly indirect and indirect (damage of cultured granular membrane cells and interstitial tissue, activation of oocyte). The use of the Pelican Gel and Kallikoprancin after egg removal, and the direct cell damage caused by the Kallikoprancin containing platinum agents, can be seen in the formation of bridges between DNA locks in egg cells during meiosis. In 2022, the eggs were collected and cultured in vitro. Egg collection, egg retrieval, speed of transportation, 19-minute needle use, egg cytosol presence, slice side, egg penetration, microscopic examination of egg cytosol, cumulus cells, immature eggs, in vitro culture Eggs were cultured in 20% Systematic Serum Substitute and 75 mIU/mL recombinant follicle stimulating hormone (M199) for 24 hours in an incubator (Gibco Labs, Grand Island, NY). After cumulus cells were removed, the presence or absence of polar bodies was confirmed under microscopy. It is confirmed that the mature eggs of M I stage can be well judged. In 2023, the accumulation of reduced cases, the evaluation of the transformation of DNA bridging repair genes, the quantitative evaluation of the recovery of miRs-301 and miRs-409- 3p in vitro culture solutions, the quantitative comparison of the development of mature microRNAs, and the consistency of DNA repair genes were discussed.