眼感染症・迅速病因診断法の開発－核酸精製不要・ポータブル型多項目遺伝子検査－

开发眼部感染快速病原学诊断方法 - 无需核酸纯化的便携式多项目基因检测 -

• 批准号: 19K09953
• 负责人: 中野 聡子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Oita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09953/
• 关键词: Direct Strip PCR; 検体直接PCR; 感染性ぶどう膜炎; 眼内炎; 角結膜炎; 臨床現場即時検査(POCT); 薬事申請; 医師主導臨床性能試験; 眼感染症; ぶどう膜炎

感染性ぶどう膜炎、眼内炎、角結膜炎は失明に至りQOLに生涯影響する重要疾患である。原因はウイルス、細菌、原虫、寄生虫と多岐にわたり、それぞれ治療法が異なる。臨床所見のみでは鑑別困難で、病因診断は遺伝子検査が有用であるが、眼科検体は微量(最少20μL)で従来検査(300μL以上)では検体量が不足した。さらに従来検査は繁雑で普及困難であった。眼感染症に対応する簡便・迅速な遺伝子検査試薬キットは国内外でも開発されておらず、病因診断に基づかない盲目的治療による不可逆な視力障害、副作用に苦しむ症例が多いことが課題で、正確・迅速・簡便な病因診断への眼科医療現場の積年の強いニーズがある。2013年に「難治性の眼感染疾患に対する迅速診断（PCR法）」が先進医療となった。しかし、保険診療化には迅速簡便で普及性の高いキット試薬開発が必要とされた。まず、我々は、核酸精製不要・検体直接PCR技術、マルチプレックス・リアルタイムPCR技術、凍結乾燥技術で構成された独自技術を用い、感染性ぶどう膜炎に対し主要病原体9項目を20μLの眼科検体から40分で検出する試薬を開発した。国内用感染性ぶどう膜炎をターゲットにしたキットを開発し、先行多施設研究を施行した。成果をまとめた論文は2021年にOphthalmology誌(IF8.2)に掲載された。産学連携による薬事申請に繋げるため、この枠組を利用した医師主導臨床性能試験を準備し、東北大学AROの支援を得て、PMDA対面助言を終了した。続いて、感染性角結膜炎・眼内炎に対する試薬を開発し、多施設評価を開始した。そしてポータブル型PCR機器に対応する試薬を開発し、基礎評価、並びに臨床検体を用いた評価を行った。現在これらの成果を学術論文にまとめている。総合的な眼感染症病因診断の臨床現場即時検査(POCT)化を成し遂げ、外来・術中など、迅速病因診断に基づく治療を可能にすることを目指している。

感染性葡萄膜炎，内嗜性炎和角膜结膜炎是导致失明并影响生活质量的重要疾病。病毒，细菌，原生动物和寄生虫的原因范围不同，而处理则不同。分化很难与单独的临床发现区分开，遗传测试对于病因诊断很有用，但是眼科标本很小（最少20μl），并且样品体积在常规测试中不足（300μL或更多）。此外，常规测试很复杂且难以使用。在日本或国外尚未开发用于处理眼部感染的简单和快速的基因测试试剂盒，许多病例患有不可逆的视力障碍和盲人治疗所引起的副作用，这些治疗未遵循病因的诊断，并且长期需要准确，快速，快速，简单的病因学诊断。 2013年，“顽固性眼科疾病（PCR）的快速诊断”成为领先的医疗。但是，为了制定医疗保险，有必要开发一种快速，简单且高度受欢迎的套件试剂。首先，我们开发了一种试剂，该试剂使用由直接标本PCR技术，多路复用的实时PCR技术和用于感染性葡萄膜炎的冻干技术组成的专有技术在40分钟内检测到20μL眼科标本中的9个主要病原体。我们开发了一种针对家庭感染性葡萄膜炎的套件，并进行了以前的多中心研究。该论文总结了结果在2021年发表在眼科（IF8.2）上。为了通过行业 - 阿卡迪血症协作导致药物应用，我们使用此框架准备了由医师领导的临床绩效测试，并在Tohoku University Aro的支持下，我们完成了PMDA的面对面建议。随后，开发了感染性角膜结膜炎和内嗜性炎的试剂，并开始了多中心评估。然后开发了与便携式PCR设备兼容的试剂，并进行了基本评估以及使用临床标本。这些结果目前已在学术论文中汇编。目的是实现对眼部感染病因的综合临床立即检查（POCT）诊断，并基于快速病因诊断（例如门诊和术中治疗）来实现治疗。

项目成果

(総説)DNA精製不要のマルチプレックスリアルタイムPCRの開発：眼科微量検体を用いた術中迅速診断

（综述）无需 DNA 纯化的多重实时 PCR 的开发：使用微量眼科标本进行快速术中诊断

• 发表时间: 2021
• 期刊: Retina Medicine10(2)
• 作者: Xiaoyan Jiang;Toshihide Kurihara;Kiwako Mori;Shin-ichi Ikeda;Hidemasa Torii and Kazuo Tsubota;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子
• 通讯作者: 中野聡子

多項目PCR検査の普及と診断率向上、予後改善 －臨床使用のポイント－

多项目PCR检测普及，提高诊断率，改善预后 - 临床使用要点 -

• 发表时间: 2023
• 作者: Xiaoyan Jiang;Toshihide Kurihara;Kiwako Mori;Shin-ichi Ikeda;Hidemasa Torii and Kazuo Tsubota;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子
• 通讯作者: 中野聡子

Multiplex Solid-Phase Real-Time Polymerase Chain Reaction without DNA Extraction for Infectious Uveitis

无需 DNA 提取的多重固相实时聚合酶链反应治疗传染性葡萄膜炎

• 发表时间: 2021
• 作者: Xiaoyan Jiang;Toshihide Kurihara;Kiwako Mori;Shin-ichi Ikeda;Hidemasa Torii and Kazuo Tsubota;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;Satoko Nakano;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野 聡子;中野 聡子;中野 聡子;中野 聡子;Nakano S.
• 通讯作者: Nakano S.

帯状疱疹の眼合併症と新しい多項目迅速PCR検査

带状疱疹的眼部并发症和新的多项目快速 PCR 检测

• 发表时间: 2021
• 作者: Xiaoyan Jiang;Toshihide Kurihara;Kiwako Mori;Shin-ichi Ikeda;Hidemasa Torii and Kazuo Tsubota;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野聡子;Satoko Nakano;中野聡子;中野聡子;中野聡子;中野 聡子;中野 聡子
• 通讯作者: 中野 聡子

（総説）【基本から学ぶ!ぶどう膜炎診療のポイント】ぶどう膜炎の原因検索 眼内液からの検査

（回顾）【从葡萄膜炎治疗的基础开始学习】从眼内液检查寻找葡萄膜炎的原因

• 发表时间: 2022
• 期刊: OCULISTA
• 作者: Xiaoyan Jiang;Toshihide Kurihara;Kiwako Mori;Shin-ichi Ikeda;Hidemasa Torii and Kazuo Tsubota;中野聡子;中野聡子;中野聡子
• 通讯作者: 中野聡子