CD302の新機能：破骨細胞の分化制御とその機構及び骨・軟骨代謝研究への展開

CD302的新功能：破骨细胞分化调控及其机制及骨软骨代谢研究进展

基本信息

批准号：
19K10053
负责人：
青山絵理子
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

レクチン様ドメインを有するC型レクチン受容体の一種であるCD302の骨芽細胞における機能について明らかにするために、まず骨芽細胞系の細胞株MC3T3-E1細胞を用いて分化誘導培養を行い、分化初期である増殖期においてCD302の発現がやや上昇することを見いだした。また、細胞密度とCD302の発現の関連を調べたところ、細胞間接触と正の相関を示すことが分かった。さらに、CD302の発現を抑制したところ、細胞数が減少し、caspase3/7の活性上昇が見られた。同様に、CD302の発現抑制は細胞遊走も抑制した。これまでの結果はCD302が細胞接着および生存維持に関与していることを示していることから、接着や生存に関わる細胞内シグナル伝達因子であるFAKおよびAktについて解析したところ、CD302の発現をノックダウンした細胞ではこの両者のリン酸化が低下することも分かった。この結果はCD302が細胞接着因子と何らかの関連を有している可能性を示している。そこで、ファイブロネクチンで固相化することで培養用プレートの細胞接着性を上昇させるとCD302の発現抑制による細胞死が抑制された。これらのことからCD302はファイブロネクチンを介した細胞接着において重要な役割を果たしており、生存維持や遊走を制御する分子の一つであることが明らかになった。さらにCD302の作用機序について明らかにするためデータベースを用いてCD302の関連分子を探索したところ、ARL13Bと結合する可能性があることが分かった。ARL13Bは一次繊毛を形成する因子の一つであることからCD302と一次繊毛形成との関係を検証するため免疫染色を行った。その結果、一次繊毛の基底部にCD302の集積が見られた。このことからCD302は一次繊毛の形成に何らかの役割を担っている可能性が考えられる。

为了阐明CD302的功能，CD302在成骨细胞中具有凝集素样域的一种C型凝集素受体，我们首先使用成骨细胞系MC3T3-E1细胞进行了分化诱导的培养，并发现在衍生过程中，CD302的表达在分化早期，CD302的表达略微增加。此外，当研究细胞密度与CD302表达之间的关系时，发现它与细胞 - 细胞接触呈正相关。此外，当抑制CD302表达时，细胞计数减少，观察到CASPASE3/7的活性增加。同样，CD302表达的抑制也抑制了细胞迁移。先前的结果表明，CD302参与了细胞粘附和生存的维持，以及参与粘附和生存的细胞内信号传导因子的分析也表明，两个细胞的磷酸化降低了CD302表达。该结果表明CD302可能与细胞粘附因子有一些关联。因此，用纤连蛋白固定通过抑制CD302表达来增加细胞粘附，从而增强培养板的细胞粘附，从而抑制细胞死亡。这些发现表明，CD302在通过纤连蛋白的细胞粘附中起重要作用，并且是调节存活和迁移的分子之一。此外，为了阐明CD302的作用机理，我们使用数据库搜索了CD302的相关分子，并发现它可以与ARL13B结合。由于ARL13B是形成原发性纤毛的因素之一，因此进行免疫染色以验证CD302与原发性纤毛形成之间的关系。结果，在初级纤毛的底部观察到CD302的积累。这表明CD302可能在原发性纤毛的形成中起作用。