Studies on the pathogenesis of the hepatitis induced by microbiota via ROS

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真菌・細菌感染による活性酸素を介した核トランスグルタミナーゼ活性化／肝障害を評価するため、慢性肝障害モデルを構築し、肝組織を回収してRNAの抽出と組織プロックの作製を行った。RNAサンプルを用いて炎症、酸化ストレスや脂質代謝関連遁伝子の発現をPCRで調べた結果、高脂肪食の負荷によりマクロファ ージの炎症性選伝子Adgrelの発現増加が認められた。さらに、炎症と酸化ストレス関連遺伝子Agdrel、Nlrp3、Tnfα、Cd14、Tlr4、Nox2の発現を指標とし、高脂肪食の負荷によりLPSに対する感受性が高まる傾向が見られた。それに対し、抗炎症サイトカインⅠ110と脂質代謝関連遺伝子Srebplcの変化は見られなかった。一方、ビフィズス菌など善玉腸内細菌による肝保護作用を評価するため、アセトアミノフェン(APAP)過剰投与に伴う肝ミトコンドリア障害による酸化ストレス性急性肝障害マウスモデルを構築し、肝組織を回収、TUNEL染色により肝細胞死を評価した。細胞表面トランスグルタミナーゼが関与することが知られている肝障害を増悪させる主要因子であるTGF-βの活性化をリン酸化Smad3の免疫染色により評価した。その結果、APAP投与したマウスの肝組織において血漿カリクレイン(PLK)に依存するTGF-βの活性化反応の増加が見られ、酸化ストレスで増大した。PLK阻害剤投与によりAPAPによるTGF-βの活性化及び肝細胞死を改善した。