BRCA1遺伝子ミスセンスバリアントのライブラリー作成とがんゲノム医療への応用

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BRCA1およびBRCA2は遺伝性乳癌卵巣癌症候群の原因遺伝子であり、生殖細胞系列の病的バリアントにより乳癌、卵巣癌をはじめ、膵癌や前立腺癌の罹患リスクが上昇する。近年、PARP阻害薬がBRCA1/2遺伝子に病的バリアントを有する上記のいずれにおいても保険診療内で使用可能となり、BRCA1/2遺伝学的検査もコンパニオン診断薬として保険償還されている。従って、BRCA1/2遺伝子のバリアントの臨床的意義を評価することは発がんのリスク評価のためにもPARP阻害薬の効果予測のためにも重要性が高い。本研究はBRCA1遺伝子のミスセンスバリアントを効率的に作成するシステムを構築し、可能な限り多くのバリアントを細胞株に発現しPARP阻害薬への感受性を解析する計画である。現在までにBRCA1のバリアント作成システムは概ね運用可能となり、現在までの45種類のバリアントを作成した。細胞株をいくつか試し、発現の状態などから卵巣癌細胞株のUWB1.289が最も扱いやすく、さらにATCCよりUWB1.289＋BRCA1を追加で購入し、ポジティブコントロールとして条件設定を行った。プラスミド導入からPARP阻害薬投与までの時間は48時間、PARP阻害薬投与から細胞増殖抑制の評価までの時間は5日間が適当であると判断し、バリアントに関するデータを蓄積している。バリアントを試した時に注目すべき違いが検出できるように調整が必要である。BRCA1の機能低下がタンパク量の低下によるものか機能喪失によるものかを分類するために発現量を評価する必要がある。バリアントの数が当初の予定より少ないために、ウェスタンブロッティングで評価を進めている。UWB1.289はp53バリアントを有する細胞株であり、可能であればp53野生型の細胞株でも試すことを考えたいが、今のところできていない。