Analysis of relationship between free-living amoebae and amoeba-resistant bacteria in living environment

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本研究では、生活環境に生息する自由生活性アメーバとアメーバ内寄生病原細菌の分布実態を明らかにして関連性を解明する。これまでに、水たまり98試料を対象に、自由生活性アメーバおよびアメーバ内寄生細菌としてレジオネラの検出を種々の方法を用いて行った。今年度は、アメーバ共培養法を用いることにより、レジオネラ菌数が増加した水たまり試料について、レジオネラの存在やその細菌叢を明らかにするために、次世代シーケンサーを用いたメタゲノム解析を行った。qPCR法の結果を比較して、アメーバ共培養法でレジオネラ菌数が1 Log以上に増加した10試料について、16S rDNA に基づく菌叢解析を行った。その結果、全体の菌叢に対するレジオネラの占有比率は、いずれの試料も0～2％程度で非常に少なかった。また、培養法でレジオネラを検出した3試料（検出菌数10 ～30 CFU/100mL、検出菌種L. pneumophila）についても同様に、16S rDNA に基づく菌叢解析を行ったところ、全体の菌叢に対するレジオネラの占有比率はいずれの試料も0～0.1%程度であった。水たまり試料からは、Sphingomonadaceae、Flavobacteriales等が優占種として検出された。アメーバ共培養法を行うことにより水たまり試料に存在する細菌叢に変化がみられ、菌種の多様性は減少傾向を示した。