質量顕微鏡法によるマイクロＲＮＡの可視化

通过质量显微镜观察 microRNA

• 批准号: 16J40109
• 负责人: 中嶋 裕子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nagoya University (2019)Hamamatsu University School of Medicine (2016-2018)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16J40109/
• 关键词: 質量分析イメージング; 核酸; MALDI-IMS; 質量顕微鏡; イメージング; マイクロRNA

前年度までに、マトリックス塗布方法の検討を行い、ラットの硝子体にアンチセンス核酸を投与して、薬物動態解析を検討した。今年度は、マトリックス塗布の工程における再現性向上のために、新しいマトリックス塗布の技術開発を行った。質量分析イメージングでは、マトリックス塗布がボトルネックとなっている。本研究では、マトリックスが予め塗布されたテープを用いて、マトリックス塗布を行う。4種類の市販のテープ（Scotch tape (CT-18, BH-24), tape 240, tape 850）にTM sprayerを用いて均一にマトリクスを塗布した。マトリックスの種類としては、2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) と α-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid (CHCA)を検討した。イメージング測定の結果、テープ法は、従来のマトリックス法と同様に生体分子をイオン化することが分かった。また、主要なリン脂質であるPC (32:0)のイオンイメージ像を構築した結果、スプレー法と同様な分布を示した。スペクトル強度の定量解析を行った結果、major ionに関しては、Scotch tape CT-18では、スプレー法の8割程度は保持していた。またminor ionに関しては、テープ法によりスプレー法の2倍程度の強度の分子も検出された。このことから、テープ法は、minor ionを高感度に検出できる可能性があることがわかった。本研究で開発したマトリックス塗布テープは、テープを組織サンプルの大きさに切って貼るだけですぐに解析に使用できることから、サンプル調製に要する時間は1分にも満たないと考えられる。本研究の結果は、マトリックス塗布テープが簡便で再現性のよい実験を提供してくれる可能性を示唆した。

Previous year's までに, マトリックス coating method の検を行い, ラットの Salt The nucleic acid injection of the progeny is done, and the dynamic analysis of the substance is done. This year's は, マトリックス coating engineering, reproducibility improvement, and new しいマトリックス coating technology are developed. Quality analysis of イメージングでは, マトリックス coating がボトルネックとなっている. In this study, the use of では, マトリックスが为されたテープを and いて, マトリックス coating を行う. Four types of commercially available Scotch tape (CT-18, BH-24), tape 240, tape 850) are coated with TM sprayer using Uniform Sprayer. The type of マトリックスのとしては, 2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) and α-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid (CHCA) を検した. The result of イメージング measurement, テープ method, 従来のマトリックス法と同様に生molecule をイオン化することが分かった.また, main なリン lipid であるPC (32:0) のイオンイ メージimage を construction した results, スプレー method と 様なdistribution をshow した.スペクトルstrength のquantitative analysis を行った results, major ion に关しては, Scotch tape CT-18 では, スプレー法の8 Cut Degree は maintained していた.またminor ionに关しては, テープ法によりスレー法の2 times the intensity of the moleculeも検出された.このことから、テープ法は、minor ionをHigh sensitivityに検出できるpossibilityがあることがわかった. This research is based on the application of ででたマトリックス coated テープは, テープをorganizing サンプルの大きさにCUTTING ってsticker るだけですぐにanalytic に uses できることから, サンプル modulation に要するTime は 1 minute にも満たないと考えられる. As a result of this study, the simplicity and reproducibility of the coating technology are shown in the figure.