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新規蛍光発生システムによる遺伝子シグナルの増幅

使用新型荧光发生系统放大基因信号

基本信息

批准号：
10J10573
负责人：
中嶋裕子
金额：
$ 1.21万
依托单位：
Ochanomizu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J10573/
关键词：
遺伝子検出蛍光分子求核置換反応

项目摘要

本研究課題では、遺伝子シグナルを増幅させることにより高感度検出することを目的としている。本年度は、求核剤による芳香族求核置換反応を引き金とする新規蛍光発生分子システムの開発を行った。蛍光プローブの基本骨格としてアミノクマリンを用いた。アミノクマリンを、塩基性下、2,4-ジニトロベンゼンスルホニルクロリドで処理することにより、蛍光発生分子を合成した。さらに、合成した蛍光分子をDNAとカップリングさせることにより蛍光プローブを合成した。求核剤となるホスホロチオエート基を導入したDNAプローブは、DNA自動合成機により合成を行った。アミノクマリンをジニトロベンゼンスルホニル基で保護した化合物と求核剤となるホスホロチオエート基を導入したプローブを標的遺伝子上で反応させた結果、ジニトロベンゼンスルホニル基が脱保護されたことにより蛍光の上昇が観察された。一方、1つミスマッチを含む配列や標的配列非存在下では、蛍光シグナルの増加はほとんど観察されなかった。これらの結果より、本プローブは、芳香族求核置換反応により標的核酸配列特異的に蛍光シグナルを発生することが明らかとなった。今後は、生細胞内での検出を目指し、より長波長の蛍光化合物(ローダミンなど)で検討する予定である。

The subject of this research is the high-sensitivity 検出することをpurpose. This year's は, による aromatic core replacement reaction を lead き金とする new rules 荍光発生molecule システムの开発を行った. The basic bone structure of the 荍光プローブのとしてアミノクマリンを用いた.アミノクマリンを, hypobasic, 2,4-ジニトロベンゼンスルホすることにより, することにより, 荍光発生molecule をcombine.さらに, synthesized した蛍光molecule をDNA とカップリングさせることにより荍光プローブを synthesized した. Find the core of DNA synthesis and DNA automatic synthesis machine synthesis.アミノクマリンをジニトロベンゼンスルホニル记でprotectionしたCompoundsブを缝子上で濜させたRESULTS、ジニトロベンゼンスルされたことにより蛍光のriseが観看された. One side, 1つミスマッチをcontaining the arrangement of the target, the arrangement of the target does not exist.これらのRESULTSより、本プローブは、aromatic core replacement anti-によりtarget Nucleic acid arrangement specific に蛍光シグナルを発生することが明らかとなった. From now on, we are planning to use long-wavelength light-emitting compounds (ローダミンなど) inside the cells to identify the target cells.