权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ＤＮＡポリメラーゼηとＲＡＤ１８が関与する新たなチェックポイント機構の解析

涉及 DNA 聚合酶 η 和 RAD18 的新检查点机制分析

基本信息

批准号：
16J40244
负责人：
松尾(楠本) 理加
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16J40244/
关键词：
Rad18 Polη DNA損傷トレランス DNAポリメラーゼ DNAポリメラーゼ・イータ RAD18 UV

项目摘要

DNA polymerase η (Polη)は損傷を鋳型にDNA合成を行うことができる損傷乗り越え型のDNAポリメラーゼである。Rad18は複製因子PCNAをユビキチン(Ub)化し、Polηはこの活性を促進する。また、Rad18はPolηとの直接結合や、複製因子PCNAのUb化によりPolηを損傷部位へリクルートする。我々はPolηのN末端がRad18のC末端と結合することを見出している。組換えタンパク質を用いた免疫沈降法により、Rad18との結合はPolηのN末端の方が全長よりも６倍程度強いことがわかった。この結果はPolηのC末端はRad18との結合を制御することを示唆している。また、PolηとRad18の結合はDNAにより阻害されることがわかった。これはPolηにおけるRad1結合部位とDNA結合部位が重複しているからであった。この結果から、Rad18がPolηをDNA損傷部位へリクルートするとRad18はDNAから乖離し、さらなるPCNAのUb化が起こりにくくなると考えらえる。次に、Rad18との結合に重要なPolηのアミノ酸のうち、DNAポリメラーゼ活性には影響を与えないアミノ酸KおよびLについて細胞レベルでの解析を行った。Polη欠損細胞である色素性乾皮症V群患者由来細胞にPolηのN末端、KまたはLまたはKLをAに置換したPolηのN末端を恒常的に過剰発現するベクターを導入した。これらの細胞の紫外線感受性をカフェイン存在下（チェックポイント機構が不活性化している状況）で調べたところ、KやL変異細胞は、変異がない細胞よりUV感受性が少し亢進していた。KL変異細胞はKやL変異細胞よりさらにUV感受性が亢進していた。これらの結果は、PolηのKやLがRad18との結合に重要で、このアミノ酸を介した両者の結合が紫外線応答に重要であることを示唆している。

DNA polymerase η (Polη) is a DNA synthesis pathway with damage to DNA. Rad18 promotes PCNA (Ub) activity. Rad18 binds directly to Polη and Ub-converts the replication factor PCNA to Polη at the site of injury. The N-terminal of Pol n is Rad18 and the C-terminal of Pol n is Rad 18. The total length of the N-terminal part of the Polη is 6 times stronger than that of the Rad18. The result is that the C-terminal of Polη is Rad18 and the combination of Rad 18 is controlled. PolηRad1 binding site and DNA binding site are repeated. As a result, Rad 18 Polη DNA damage site was found in Rad18 DNA. Secondary, Rad18 and binding important PolηPol n deficient cells were found in Xeroderma pigmentosum group V patients, and the N-terminal, K-terminal, KL, A, and N-terminal of Pol n were found in the cells. In the presence of UV sensitivity of these cells, the UV sensitivity of these cells is increased. KL heterotrophic cells K and L heterotrophic cells The result is that the combination of Polη K and L with Rad18 is important, and the combination of Pol η K and L with Rad 18 is important.