フタル酸エステルの母体暴露が世代を越えて精子形成異常を引き起こすエピ変異の解明

阐明由于母体接触邻苯二甲酸酯而导致各代精子发生异常的表观突变

• 批准号: 18J40019
• 负责人: 丹藤 由希子
• 金额: $ 2.33万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18J40019/
• 关键词: DEHP; DNAメチル化; 精子形成

プラスチックの可塑剤として社会生活の中で広範囲に用いられているジエチルヘキシルフタル酸（DEHP）を妊娠マウスに暴露すると、F1からF3の雄で精子や精細管の異常および精原細胞の機能異常が認められ、それがDNAメチル化変化によるものと考えられている。しかし、そのメカニズムは明らかになっていない。そこで本研究は、DEHPが世代を越えて精子形成に異常を及ぼすエピゲノム変異を同定することを目的としている。本年度は以下の項目を実施した。１．DEHP母体暴露による生殖細胞のエピ変異遺伝子候補の選出昨年度に施行したDEHP母体暴露後F1の精原細胞を用いたメチローム解析にて、DEHP母体暴露直後の胎齢19.5 日目に高メチル化が見られた精子形成関連遺伝子のうち，11遺伝子が精原細胞でも維持されていることが分かった。他個体の精原細胞で上記11遺伝子の発現を定量PCRで検証したところ、これらの中で3遺伝子の発現の有意な低下を認め、トランスクリプトームの結果も同様の発現低下を示した。またバイサルファイトシーケンスにて、メチロームの結果と同様に3遺伝子のメチル化率の増加を示した。２．エピ変異候補遺伝子のメチル化による発現制御の検証上記の定量PCRの結果で発現低下を認めた3遺伝子について、RRBSで検出されたプロモーター領域のメチル化が遺伝子発現の低下を誘導するか否かをin vitroで検証することにした。RRBSで検出したメチル化領域をクローニングしてアッセイ用ベクターに組み込み、HEK293T細胞にトランスフェクションした。48時間後の細胞を回収してルシフェラーゼアッセイを行った結果、3遺伝子全てにおいてメチル化したコンストラクトでルシフェラーゼ活性の有意な低下を認めた。よって、3遺伝子の発現はプロモーターのメチル化により制御を受けることが示された。

プ ラ ス チ ッ ク の plastic tonic と し て in social life の で hiroo van 囲 に with い ら れ て い る ジ エ チ ル ヘ キ シ ル フ タ ル acid (DEHP) を pregnancy マ ウ ス に exposed す る と, F1 か ら F3 の male sperm で や seminiferous tubule の abnormal お よ び SSCS の parafunction が recognize め ら れ, そ れ が DNA メ チ ル change - change に よ る も の と exam え ら れ Youdaoplaceholder0 て る. <s:1> になって, そ そ メカニズム メカニズム メカニズム Ming ら になって になって な な. そ こ で は, this study DEHP を が generation more え て abnormal spermatogenesis に を and ぼ す エ ピ ゲ ノ ム - different を with fixed す る こ と を purpose と し て い る. The following を items were implemented in the current year た. 1. DEHP maternal exposure に よ る germ cell の エ ピ - different heritage 伝 son alternate の elected last year に imposed し た DEHP after maternal exposure to F1 の SSCS を use い た メ チ ロ ー ム parsing に て, DEHP の tire 齢 19.5 days after maternal exposure to direct item に high メ チ ル change が see ら れ た spermatogenesis masato even heritage 伝 son の う ち, The 11 spermatogonial 伝 offspring が spermatogonial cells で <e:1> maintain the されて る る とが とが とが division った った. His individual の SSCS で written 11 heritage 伝 son の 発 now を quantitative PCR で 検 card し た と こ ろ, こ れ ら の で 3 heritage 伝 son の 発 の deliberately low な を now recognize め, ト ラ ン ス ク リ プ ト ー ム も の results with others in の 発 now low を shown し た. ま た バ イ サ ル フ ァ イ ト シ ー ケ ン ス に て, メ チ ロ ー ム と の results with others in に 3 heritage 伝 son の メ チ ル の raised the rate plus を shown し た. 2 エ ピ - traces of different alternate 伝 son の メ チ ル change に よ る 発 now suppression の 検 card written の quantitative PCR results の で 発 now low を recognize め た 3 heritage 伝 son に つ い て, RRBS で 検 out さ れ た プ ロ モ ー タ ー field の メ チ ル change が heritage 伝 son 発 now low の を induced す る か no か を in vitro で 検 card す る こ と に し た. RRBS で 検 out し た メ チ ル mineralization areas を ク ロ ー ニ ン グ し て ア ッ セ イ with ベ ク タ ー に group み 込 み, HEK293T cells に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し た. を back after 48 time の cells 収 し て ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ イ を line っ た results, 3 but 伝 full て に お い て メ チ ル change し た コ ン ス ト ラ ク ト で ル シ フ ェ ラ ー ゼ active low の intentionally な を recognize め た. よ っ て, 3 but 伝 の 発 now は プ ロ モ ー タ ー の メ チ ル change に よ り suppression を by け る こ と が shown さ れ た.

项目成果

Epi-mutations for spermatogenic defects by maternal exposure to Di (2-ethylhexyl) phthalate

• DOI: 10.1101/2021.05.19.444770
• 发表时间: 2021-05
• 期刊: bioRxiv
• 作者: Yukiko Tando;H. Hiura;Asuka Takehara;Yumi Ito-Matsuoka;T. Arima;Y. Matsui