フタル酸エステルによるエピゲノム変化誘導と世代間継承機構の解明

邻苯二甲酸酯诱导表观基因组变化并阐明代际遗传机制

• 批准号: 21K12254
• 负责人: 丹藤 由希子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K12254/
• 关键词: 生殖細胞; エピゲノム; フタル酸エステル; マウス

プラスチックの可塑剤として社会生活に普及しているフタル酸ビス(2-エチルヘキシル)（DEHP）の妊娠期の暴露は複数世代にわたる子孫の精子形成異常を誘発するが、その分子機序は不明であった。申請者はこれまでの研究で、DEHP母体暴露後のマウス生殖細胞で精子形成に関わる遺伝子の特異的なメチル化亢進を見出した。そこで本研究は、DEHPの遺伝子特異的なメチル化亢進による精子形成異常の誘導機構と、精子形成異常の世代間継承に関わるエピゲノム機構を解明することを目的とする。二年目は、DEHP母体暴露後の胎仔生殖細胞における精子形成遺伝子の特異的メチル化亢進のメカニズムについて、ROSの増加が関わっている可能性を検証した。胎齢18日目のオス精巣細胞を単一化し、MEHPを添加した後の生殖細胞のROS量をROS検出蛍光試薬にて解析したところ、MEHP添加群にて有意なROSの増加を認めた。そこで、ROSの増加と精子形成関連遺伝子との関連性を調べるため、MEHP添加後の生殖細胞のバイサルファイトシーケンスを行うことを目指した。単一細胞化後の精巣細胞にMEHPまたはコントロールのDMSOを添加して培養したところ、6時間後以降でDMSO添加群での大幅な生殖細胞の減少を認めた。培養後の回収生殖細胞数とバイサルファイトシーケンス可能な細胞数を勘案し、MEHP添加から30分後でメチル化レベルを検証することとした。現在は細胞回収を行っており、回収でき次第バイサルファイトシーケンスに進む。また,精子形成異常の世代間継承に関わるエピゲノム機構については、DEHP母体曝露されたF1およびF2精子精子におけるH3K9me3のChIP-seqのためのサンプル回収を完了した。ChIP-seqの条件検討ではポジティブコントロール遺伝子の濃縮が再現性良く見られる条件を見出すことができたため、速やかにChIP-seqを行うことを予定している。

DEHP ) Exposure during pregnancy causes abnormal sperm formation in multiple generations of children and grandchildren, and the molecular sequence of the disease is unknown. The applicant's research is on the specific anabolic hyperplasia of germ cells and sperm formation after maternal exposure to DEHP. In this study, DEHP is an inducer of spermatogenesis abnormalities that are specific to spermatogenesis. The structural and sperm formation abnormalities are inherited from generation to generation. Two-year-old, specific test results for sperm formation in fetal germ cells after maternal exposure to DEHPのメカニズムについて, ROS のincrease and increase the possibility of わっている possibility した. The amount of ROS in sperm cells and the amount of ROS in germ cells after the addition of MEHP in the 18th day of pregnancy OS検出荍光 try 薬にてanalyticsしたところ,MEHP add groupにて有purposeなROSのincrease and recognizeめた. ME After the addition of HP, the germ cell のバイサルファイトシーケンスを行うことを Eye refers to した. After single cell transformation, the sperm cells were cultured with MEHP and DMSO added. If you add DMSO after 6 hours, the number of germ cells will decrease significantly. The number of germ cells recovered after culture and the possible number of germ cells can be determined Cases, MEHP additions can be made after adding 30 minutes of でメチル化レベルを検证することとした. Now we are doing cell recycling and recycling cells. F1およびF2 sperm sperm におけるH3K9me3のChIP-seqのためのサンプルrecoveryをfinishedした. Conditions of ChIP-seqるConditions すことができたため, speed やかにChIP-seq を行 うことを下注している.

项目成果

精子形成過程におけるLARP7 の機能解析

LARP7在精子发生过程中的功能分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Tando Y;Hiura H;Takehara A;Ito-Matsuoka Y;Arima T;Matsui Y.;丹藤 由希子
• 通讯作者: 丹藤 由希子

妊娠期のフタル酸エステル暴露が仔の精子形成異常を引き起こすエピゲノム変異の同定

鉴定因怀孕期间接触邻苯二甲酸盐而导致后代精子发生异常的表观基因组突变

• 发表时间: 2021
• 作者: Tando Y;Hiura H;Takehara A;Ito-Matsuoka Y;Arima T;Matsui Y.;丹藤 由希子;丹藤由希子1，樋浦仁2，竹原雅子花1，伊藤-松岡由美1，有馬隆博3，松居靖久1丹藤由希子，樋浦仁，竹原雅子花，伊藤-松岡由美，有馬隆博，松居靖久
• 通讯作者: 丹藤由希子1，樋浦仁2，竹原雅子花1，伊藤-松岡由美1，有馬隆博3，松居靖久1丹藤由希子，樋浦仁，竹原雅子花，伊藤-松岡由美，有馬隆博，松居靖久