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鏡像VHH抗体を基盤とした免疫原性低減型新規免疫チェックポイント阻害剤の創製

基于镜像VHH抗体创建免疫原性降低的新型免疫检查点抑制剂

基本信息

批准号：
22KJ1661
负责人：
青木啓輔
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者は、免疫原性を低減させた新たなタンパク質製剤の創製を目指し、VHH抗体の鏡像分子「鏡像VHH抗体」の開発を進めている。本年度は、前年度までに見出した、疾患に関連する標的タンパク質に対して特異的に結合する鏡像VHH抗体の化学合成ルートの構築に取り組んだ。また、鏡像VHH抗体取得に向けたスクリーニングに利用するための新たな標的として、化学合成例のない200アミノ酸残基程度からなる標的タンパク質の化学合成に取り組んだ。前年度までに2種類のVHH抗体の化学合成ルートを確立していたが、今回見出した候補配列は中間体フラグメントの溶解性が低くHPLC精製が困難であることが判明した。そこで精製法の検討を行うとともに合成ルートの見直しと溶解性向上タグの付加を行い、必要量を取得可能な合成経路を確立した。取得した鏡像VHH抗体の適切なフォールディング条件を見出し、天然型の標的タンパク質に対して特異的に結合することを明らかにした。また、鏡像VHH抗体をマウスに免疫した時に産生される抗体量を測定し、鏡像VHH抗体が天然型のVHH抗体と比較して免疫原性が低いことを実証した。また、別の標的タンパク質に結合親和性を示す鏡像VHH抗体の化学合成の確立に向けた検討を行った。上述の鏡像VHH抗体の化学合成で得られた知見を活用することで、溶解性等の問題をクリアし、容易に大量供給可能な合成ルートを確立した。さらに、化学合成の報告がない標的タンパク質の合成ルートの構築に着手した。ペプチドフラグメントの化学合成法とフラグメント連結経路の検討を行うとともに、溶解性向上タグをシステイン残基に選択的に導入することで、全長配列を構築した。その後、活性型タンパク質取得に向けたフォールディング操作を行い、組換えタンパク質と立体構造および受容体結合活性が同等であることを確認した。

Research representatives are looking forward to the development of a mirror molecule of VHH antibody called "mirror VHH antibody" to reduce immunogenicity and create new quality agents. This year, we have seen the development of new, disease-related target groups for the chemical synthesis of mirror-image VHH antibodies. VHH antibody acquisition and utilization of new target compounds, chemical synthesis of target compounds, chemical synthesis of target compounds with 200 amino acid residues The chemical synthesis of two kinds of VHH antibodies was established in the past year, and the solubility of candidate alignment intermediates was low. HPLC purification was difficult. The purification method is discussed in detail, and the solubility is increased to obtain the possible synthesis route. To obtain the mirror image of VHH antibody, the appropriate conditions are found, and the natural type of VHH antibody is found in the specific binding conditions. The amount of antibody produced when the mirror VHH antibody is immunized is determined, and the immunogenicity of the mirror VHH antibody is lower than that of the native VHH antibody. The chemical synthesis of VHH antibodies was established by the determination of binding affinities of different target proteins. The chemical synthesis of the mirror VHH antibody has been established due to the problems of knowledge utilization, solubility, etc., and easy mass supply. In addition, the report of chemical synthesis was carried out in the construction of chemical synthesis units. The chemical synthesis method of the protein, the synthesis method of the protein After the formation of the active type, the quality of the active type is obtained, and the operation of the active type is performed. The composition of the active type, the quality of the active type, and the binding activity of the active type are confirmed.