鏡像VHH抗体を基盤とした免疫原性低減型新規免疫チェックポイント阻害剤の創製

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研究代表者は、免疫原性を低減させた新たなタンパク質製剤の創製を目指し、VHH抗体の鏡像分子「鏡像VHH抗体」の開発を進めている。本年度は、前年度までに見出した、疾患に関連する標的タンパク質に対して特異的に結合する鏡像VHH抗体の化学合成ルートの構築に取り組んだ。また、鏡像VHH抗体取得に向けたスクリーニングに利用するための新たな標的として、化学合成例のない200アミノ酸残基程度からなる標的タンパク質の化学合成に取り組んだ。前年度までに2種類のVHH抗体の化学合成ルートを確立していたが、今回見出した候補配列は中間体フラグメントの溶解性が低くHPLC精製が困難であることが判明した。そこで精製法の検討を行うとともに合成ルートの見直しと溶解性向上タグの付加を行い、必要量を取得可能な合成経路を確立した。取得した鏡像VHH抗体の適切なフォールディング条件を見出し、天然型の標的タンパク質に対して特異的に結合することを明らかにした。また、鏡像VHH抗体をマウスに免疫した時に産生される抗体量を測定し、鏡像VHH抗体が天然型のVHH抗体と比較して免疫原性が低いことを実証した。また、別の標的タンパク質に結合親和性を示す鏡像VHH抗体の化学合成の確立に向けた検討を行った。上述の鏡像VHH抗体の化学合成で得られた知見を活用することで、溶解性等の問題をクリアし、容易に大量供給可能な合成ルートを確立した。さらに、化学合成の報告がない標的タンパク質の合成ルートの構築に着手した。ペプチドフラグメントの化学合成法とフラグメント連結経路の検討を行うとともに、溶解性向上タグをシステイン残基に選択的に導入することで、全長配列を構築した。その後、活性型タンパク質取得に向けたフォールディング操作を行い、組換えタンパク質と立体構造および受容体結合活性が同等であることを確認した。