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胆汁うっ滞症研究への応用を目指したヒト肝内胆管チップの開発

人肝内胆管芯片的研制应用于胆汁淤积研究

基本信息

批准号：
22KJ1862
负责人：
出口清香
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ1862/
关键词：
肝臓チップ胆汁うっ滞症肝細胞胆管上皮細胞

项目摘要

本研究では、胆汁うっ滞症の病態解明とそれに基づく治療薬開発を目指して、肝細胞と胆管を立体的に配置したヒト肝臓モデルの開発を行った。具体的には、生体模倣デバイスへ肝細胞及び胆管上皮細胞を播種し、肝細胞から肝内胆管に向かう胆汁酸の流れを再現できる「ヒト肝内胆管チップ」を開発した。2022年度は、上下に二つの流路（チャネル）を有するマイクロ流体デバイスを使用し、肝細胞としてヒト初代培養肝細胞を上側チャネルに、胆管上皮細胞として肝内胆管癌細胞株HuCCT1細胞を下側チャネルに播種した。免疫染色の結果、ヒト肝内胆管チップにおいて、サイトケラチン19陽性の胆管上皮細胞が管状の構造をとり、アルブミン陽性の肝細胞が胆管様構造に隣接していた。これらの結果より、肝細胞層および管状の胆管様構造を有する肝内胆管チップを構築できることが示唆された。ヒト肝臓において、胆汁の主成分である胆汁酸は胆管への輸送量が多いが、血清蛋白質であるアルブミンは胆管内へ輸送されづらいことが知られている。開発した肝内胆管チップがヒト肝臓における生理活性物質の選択的な輸送を再現可能か検討するため、肝内胆管チップの胆管チャネルへの胆汁酸およびアルブミンの移行量を測定した。その結果、胆汁酸は胆管チャネルへの移行量が多く、アルブミンはほとんど輸送されなかった。したがって、肝内胆管チップを用いて、ヒト肝臓における生理活性物質の輸送を再現できることが示唆された。以上の結果より、ヒト肝臓を模倣した三次元構造および機能を有した肝内胆管チップの開発に成功した。現在、胆汁酸トランスポーターを阻害することが知られている薬物をヒト肝内胆管チップに作用し、ヒト肝内胆管チップを用いた薬物誘発性胆汁うっ滞症を再現する検討に着手した。

This study aims to clarify the pathologies of bile duct disease and the development of basic therapy for bile duct disease. Specific biological mimicry of hepatocytes and bile duct epithelial cells was developed. Hepatocytes were seeded and bile acid flow from the intrahepatic bile duct was reproduced. In 2022, there were two flow paths: upper and lower flow paths, primary culture of hepatocytes, upper flow paths of bile duct epithelial cells, and lower flow paths of intrahepatic cholangiocarcinoma cell line HuCCT1. Immunostaining results: intrahepatic bile duct epithelial cells, tubular structures, liver cells, adjacent structures. The results showed that the liver cell layer and the tubular bile duct structure were different. The main component of bile is bile acid. The main component of bile acid is bile duct. The main component of serum protein is bile duct. Determination of the amount of bile acid and bile duct migration in the development of intrahepatic bile ducts The results showed that the migration amount of bile acid in bile duct was more than that in bile duct. The transport of physiologically active substances in the liver and bile duct is also discussed. As a result, the development of intrahepatic bile duct was successful due to its three-dimensional structure and function. Now, bile acid is a barrier to the development of bile duct disease, and the development of bile duct disease is under discussion.