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定量的生細胞観察によるミトコンドリアゲノムの新規制御機構の解明

通过定量活细胞观察阐明线粒体基因组的新调控机制

基本信息

批准号：
22KJ2068
负责人：
觀音裕考
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、ミトコンドリアDNA (mtDNA) からなる核様体構造の形態制御メカニズムの探索と動態解析基盤の構築である。昨年度までに核様体形態を変化させる因子を得る目的でsiRNAスクリーニングを実施し、発現抑制することで核様体を大きく変化させる候補遺伝子を同定することに成功した。この遺伝子の阻害剤を用いてもRNAiを行った際と同様の結果を得ることができていた。また、候補遺伝子をノックアウト（KO）した細胞株も樹立できていた。今年度はこの遺伝子による核様体形態変化メカニズムがどのようなものであるかを検討した。樹立したKO細胞を用いた解析から、候補遺伝子によって引き起こされる核様体形態変化にはミトコンドリア膜形態の変化が必要であることが明らかになった。ミトコンドリア膜形態は分裂と融合により制御されており、そのどちらが寄与しているかを確認した。今年度はミトコンドリア膜融合に注目して解析を行い、in vitroでの解析系（T. Ban et al. 2017）を用いて確認したところ、候補遺伝子の引き起こす現象がミトコンドリア膜融合活性を変化させていることが明らかになった。来年度以降は引き続き候補遺伝子によりミトコンドリア膜形態が変化するメカニズムを明らかにするとともに、論文による発表の準備を進めていく。また、候補遺伝子の解析と並行して、核様体の動態解析基盤の構築についても引き続き進めており、ライブイメージングを通じて核様体の新たな動的特性を解析することのできる手法の構築に成功した。次年度以降に、この実験系を用いて正常な核様体及び形態変化した核様体についての動的な特性を理解することができると考えている。

The purpose of this study is to explore the morphological control of nuclear structure and the construction of dynamic analysis base plate. Last year, we successfully implemented siRNA cloning and discovered inhibition to achieve the goal of modifying nuclear body morphology and identifying candidate genes for nuclear body modification. The result of this process is that the virus can be detected in the middle of the cell. The cell line was established as a candidate. This year, the nuclear morphology of the nucleus is changed. To establish KO cells, we need to analyze them, and we need to select candidate genes to change the morphology of the nucleus. The shape of the film is divided into two parts: the first part is divided into two parts: the second part is divided into three parts: the first part is divided into three parts: the second part is divided into four parts: the third part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: the fourth part is divided This year, the analysis system (T. Ban et al. 2017). This study was used to confirm the presence of a candidate gene in the membrane fusion activity. In the coming year, the preparation for the next stage of the project will be carried out in accordance with the requirements of the project. The analysis and parallel construction of candidate genes and the construction of dynamic analysis base plates of nuclear bodies are successful in analyzing the new dynamic characteristics of nuclear bodies. In the next year, the normal nuclear body and the morphological change of the nuclear body are used to understand the dynamic characteristics of the nuclear body.