変異型DCC遺伝子を利用した口腔癌細胞のアポトーシス誘導

利用突变DCC基因诱导口腔癌细胞凋亡

• 批准号: 25670779
• 负责人: 坂井 英隆
• 金额: $ 2.33万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25670779/
• 关键词: 扁平上皮癌; DCC; アポトーシス

本研究では、Netrin-1結合部位を除去したDCCの一部を癌細胞に強制発現させることでアポトーシスの誘導を試み、その解析を行った。DCCのレセプター部分を欠失させたcDNA (⊿DCC) をベクターに組み込み、4種類の癌細胞に導入した。癌細胞株は扁平上皮細胞癌細胞株(MISK81-5, HSC3) と胃の腺癌細胞株（MKN45, MKN74) を用いた。まず、MTS assayを用いて4種類の細胞株における細胞生存率を検討した。次に、active-caspase-3蛋白の発現の変化をWestern blotting法にて検討した。さらに、TUNEL染色を行った。その結果、4種類の癌細胞においてΔDCCベクターを導入した細胞群は、コントロール群に対して残存細胞数が有意に少なかった。また、Western blottingによりΔDCCベクター導入群にactive-caspase-3蛋白の発現量の上昇が認められた。さらに、TUNEL染色によりΔDCCベクター導入群にTUNEL陽性細胞が多く認められた。以上より、⊿DCCベクター導入によるMISK81-5, HSC3, MKN45, MKN74細胞株の癌細胞に対するアポトーシス誘導の可能性が示唆された。そして、⊿DCCベクターを扁平上皮癌モデルマウスに導入し癌組織への影響を検討する目的で、口腔扁平上皮癌細胞株HSC3をマトリゲルと混合し、ヌードマウスの背部皮下に移植した。移植3週間後から1日おきに計3回⊿DCCベクターを接種し、2週間後に癌組織を回収し、HE染色による組織観察を行ったところ、⊿DCC接種群では癌細胞が減少し、癌胞巣に縮小傾向が認められた。さらなる詳細な検討が必要ではあるが、本研究結果により、⊿DCCはin vitroおよびin vivoにおいて癌細胞のアポトーシスを誘導することが示唆された。

This study で は combining site, Netrin - 1 を remove し た DCC の a を cancer に forced 発 now さ せ る こ と で ア ポ ト ー シ ス の induced を み, そ の parsing line を っ た. DCC の レ セ プ タ ー part lost を owe さ せ た cDNA (⊿ (DCC) を ベ ク タ ー に group み 込 み, 4 species の cancer に import し た. Cancer cell lines と squamous cell carcinoma cell lines (MISK81-5, HSC3) と gastric <s:1> adenocarcinoma cell lines (MKN45, MKN74) を use た た. Youdaoplaceholder0, MTS assayを to investigate the survival rate を検 of における cell lines of four types of <s:1> cell lines using まず て. The に and active-caspase-3 protein <s:1> changes をWestern blotting method にて検 discusses <s:1> た. Youdaoplaceholder0, TUNEL stain を rows った. そ の results, 4 species の cancer に お い て Δ DCC ベ ク タ ー を import し は た cell populations, コ ン ト ロ ー ル group に し seaborne て remaining cells number が less interested in に な か っ た. ま た, Western blotting に よ り Δ DCC ベ ク タ ー import group に active caspase - 3 protein の 発 now rising volume の が recognize め ら れ た. Youdaoplaceholder0, TUNEL staining によ によ ΔDCCベ タ タ ベ introduction population に tunel-positive cells が more く recognition められた. Above よ り, ⊿ DCC ベ ク タ ー import に よ る MISK81-5, HSC3, MKN45, MKN74 cell lines の cancer に す seaborne る ア ポ ト ー シ ス induced が の possibility in stopping さ れ た. そ し て, ⊿ DCC ベ ク タ ー を squamous cell carcinoma モ デ ル マ ウ ス に import し cancerous tissue へ の influence を beg す 検 で る purpose, oral squamous cell cancer cells HSC3 を マ ト リ ゲ ル と mixed し, ヌ ー ド マ ウ ス の back subcutaneous に transplantation し た. Transplantation after 3 weeks か ら 1 お き に meter 3 back ⊿ DCC ベ ク タ ー を vaccination し, 2 weeks after に cancerous tissue を back 収 し, HE staining に よ る line organization 観 examine を っ た と こ ろ, ⊿ (DCC population で は cancer が reducing し, cancer cell 巣 に narrowing tendency が recognize め ら れ た. Beg が さ ら な る detailed な 検 necessary で は あ る が, this study に よ り, ⊿ DCC は in vitro お よ び in vivo に お い て cancer の ア ポ ト ー シ ス を induced す る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

扁平上皮癌移植モデルマウスを用いたNetrin-1結合部位欠失DCC遺伝子導入の影響

Netrin-1结合位点缺失DCC基因导入对鳞状细胞癌移植模型小鼠的影响

• 发表时间: 2013
• 作者: 和田 裕子;清島 保;藤原 弘明;坂井 英隆
• 通讯作者: 坂井 英隆

Chemoresistance to concanamycin A1 in human oral squamous cell carcinoma is attenuated by an HDAC inhibitor partly via suppression of Bcl-2 expression.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0080998
• 发表时间: 2013
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Kiyoshima T;Yoshida H;Wada H;Nagata K;Fujiwara H;Kihara M;Hasegawa K;Someya H;Sakai H
• 通讯作者: Sakai H

Analysis of the Anti-tumor Effects of V-ATPase inhibitor, Concanamycin A1, on Oral Squamous Cell Carcinoma

V-ATP酶抑制剂刀那霉素A1对口腔鳞状细胞癌的抗肿瘤作用分析

• 作者: Hisashi Yoshida;Ying Wang;Tamotsu Kiyoshima;Hidetaka Sakai
• 通讯作者: Hidetaka Sakai

ヌードマウス背部に移植された癌細胞に対する変異型DCC遺伝子接種の効果

突变型DCC基因接种对裸鼠背部癌细胞移植的影响

• 作者: 和田 裕子;清島 保;藤原 弘明;坂井 英隆;和田 裕子
• 通讯作者: 和田 裕子

V-ATPase 阻害剤 Concanamycin A 抵抗性口腔扁平上皮癌細胞株に対する SAHA 併用による細胞増殖抑制効果

V-ATP酶抑制剂SAHA联合对刀刀霉素A耐药细胞增殖抑制作用

• 发表时间: 2014
• 作者: 清島保;永田健吾;和田裕子;藤原弘明;坂井英隆
• 通讯作者: 坂井英隆