器官培養法を用いた歯胚幹細胞の単離・同定と歯牙再生への応用

器官培养法分离鉴定牙胚干细胞及其在牙齿再生中的应用

• 批准号: 14657469
• 负责人: 坂井 英隆
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657469/
• 关键词: 歯胚; 発生・再生; cDNAサブトラクション; in situ hybridization; アンチセンス法; 器官培養; 幹細胞純化; yeast two hybrid法; 幹細胞純化法; 歯原性幹細胞; 発生と再生

平成16年度はcDNAサブトラクション法により検出した歯胚の発生初期に発現する遺伝子のうち、塩基配列をベースに予想される蛋白構造のモチーフから、細胞膜表面の受容体と予想される新規の因子について検討を行った。すなわち、この因子のcDNA構造を元に細胞外、細胞内のそれぞれのドメインを構成する蛋白の精製を行い、この蛋白を用いて抗体の作成に取りかかっている。細胞外ドメインに対する抗体が作成されれば、フローサイトメトリーやHoechist33342蛍光色素を用いた細胞分離法にて回収した細胞から、さらにこの因子を発現している細胞を抽出する事ができ、歯胚の基となる細胞(歯原性幹細胞)の単離・同定が可能となり、また細胞内ドメインに対する抗体を用いて、歯原性幹細胞の候補細胞での細胞内情報伝達の系を明らかにすることができる。したがってこの因子の構造的・機能的解析により歯胚再生への新たな段階へ研究を進める事ができる。Runx2/Cbfa1について、isoformの違いによる歯胚の発生・分化との関連を、器官培養法とアンチセンス法(S-ODN法)を組み合わせて検索を行い、タイプII/III Runx2/Cbfa1が歯胚の発生・発育・分化に関与していることを明らかにし、Boneに投稿である。また、我々がcDNAサブトラクション法により検出した歯胚形成に関連した遺伝子のうち、thymosin beta4(Tb4)、PGK-1についてin situ hydridization法による歯胚における発現状況を検索し、これらが歯胚の発生と分化に関連している事を明らかにした。特にTb4については、matrix metaloproteinase-2,-9の発現に関与している事を明らかにし、Histchemistry and Cell Biologyに投稿中である。PGK-1については、解糖系酵素であるにもかかわらず、歯胚を始め、胎生期の肝臓や肺に限局して発現が認められ、しかも未知の蛋白と複合体を形成している可能性をWestern blot法により見い出した。現在この未知の蛋白の検出を試み、複合体の機能解析を行っている。

Pp.47-53 16 year は cDNA サ ブ ト ラ ク シ ョ ン method に よ り 検 out し た 歯 embryo の 発 born early に 発 now す る heritage 伝 son の う ち, salt base with column を ベ ー ス に to think さ れ る protein structure の モ チ ー フ か ら, cell membrane surface の と to want to let body さ れ る new rules の factor に つ い て 検 line for を っ た. す な わ ち, こ の factor の cDNA structure を yuan に extracellular and intracellular の そ れ ぞ れ の ド メ イ ン を constitute す る protein の refined を い, こ の protein を with い て antibody の made に take り か か っ て い る. Extracellular ド メ イ ン に す seaborne る antibody が made さ れ れ ば, フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー や Hoechist33342 蛍 photopigment を with い た cell separation に て back 収 し た cells か ら, さ ら に こ の factor を 発 now し て い る cells を spare す る matter が で き, 歯 embryo の と な る cells (歯 original stem cells) の 単 leaves, with が can deal Can と な り, ま た intracellular ド メ イ ン に す seaborne を る antibody with い て, 歯 original stem cells の alternate で の intelligence 伝 in cells of の を and Ming ら か に す る こ と が で き る. の し た が っ て こ の factor structure, function analytical に よ り 歯 embryo regeneration へ の new た な Duan Jie を へ research into め る matter が で き る. Runx2 / Cbfa1 に つ い て, isoform の violations い に よ る 歯 embryo の 発 raw, differentiation と の masato even を, organ culture method と ア ン チ セ ン ス method - ODN method (S) を group み close わ せ て 検 cable line を い, タ イ プ II/III Runx2 / Cbfa1 が 歯 embryo の 発 raw, 発 education, differentiated に masato and し て い る こ と を Ming ら か に し, ipads contribute に で あ る. ま た, I 々 が cDNA サ ブ ト ラ ク シ ョ ン method に よ り 検 out し た 歯 embryogenesis に masato even し た posthumous son 伝 の う ち, thymosin beta4 (Tb4), PGK - 1 に つ い て in situ Hydridization method に よ る 歯 embryo に お け る 発 now situation を 検 し and こ れ ら が 歯 embryo の 発 raw と differentiation に masato even し て い る matter を Ming ら か に し た. Special に Tb4 に つ い て は, matrix metaloproteinase 2, 9 の 発 now に masato and し て い る matter を Ming ら か に し, Histchemistry and Cell Biology に contribute in で あ る. PGK - 1 に つ い て は, sugar solution enzyme で あ る に も か か わ ら ず, 歯 を め, TaiShengQi の is crucial liver や lung に limit bureau し て 発 が now recognize め ら れ, し か と も の unknown protein complexes を form し て い る possibility を Western blot method に よ り see い out し た. Now, the <s:1> <s:1> unknown <s:1> protein <e:1> 検 conducts を tests み, and the complex <e:1> functions are analyzed を and って る る.

项目成果

Hideyuki goto et al.: "Expressions of cyclin D1 and GSK-3beta and their predictive value of prognosis in squamous cell carcinomas of the tongue"Oral Oncology. 31・6. 549-556 (2002)

Hideyuki goto 等：“细胞周期蛋白 D1 和 GSK-3β 的表达及其对舌鳞状细胞癌预后的预测价值”口腔肿瘤学 31・6（2002）。

Hiroko Wada et al.: "Expression of heat shock proteins, Hsj2, Hsc73 and Hsp86 during the morphogenesis of the mouse lower first molar"The Histochemical Journal. 34・3-4. 105-109 (2002)

Hiroko Wada 等：“小鼠下第一磨牙形态发生过程中热休克蛋白、Hsj2、Hsc73 和 Hsp86 的表达”组织化学杂志 34·3-4（2002）。

Expression pattern of Epstein-Barr virus latent genes in cell lines derived from oral squamous cell carcinoma.

口腔鳞状细胞癌细胞系中 Epstein-Barr 病毒潜伏基因的表达模式。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Oral Medicine and Pathology 9
• 作者: A.M.E.Rasul;et al.
• 通讯作者: et al.

Tamotsu Kiyoshima et al.: "An L1 element disrupts human bone sialoprotein promoter : lack of tissue-specific regulation by distalless5 (Dlx5) and runt homeodomain protein2 (Runx2)/core building factor a1 (Cbfa1) elements"Gene. 299. 205-217 (2002)

Tamotsu Kiyoshima 等人：“L1 元件破坏人骨唾液酸蛋白启动子：缺乏远端 5 (Dlx5) 和 runt 同源域蛋白 2 (Runx2)/核心构建因子 a1 (Cbfa1) 元件的组织特异性调节”基因。

In Situ Expression of RANKL, RANK, OPG and Cytokines in Osteoclasts of Rat Periodontal Tissue.

大鼠牙周组织破骨细胞中 RANKL、RANK、OPG 和细胞因子的原位表达。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Periodontal Research 39(1)
• 作者: T.Ogasawara;Y;et al.
• 通讯作者: et al.