Mechanisms of maternal mRNA-specific knockdown in Ciona intestinalis

海鞘母体 mRNA 特异性敲低机制

• 批准号: 23657140
• 负责人: SASAKURA Yasunori
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23657140/
• 关键词: 脊索動物; ホヤ; 母性因子; トランスポゾン; ノックダウン

This research purposed the characterization of the targeted and specific knockdown method of maternal mRNAs in the ascidian Ciona intestinalis, and understanding the mechanisms of the localization of maternal mRNAs in Ciona with the knockdown method. We identified the DNA elements necessary for the knockdown. eGFP, Kaede, mKO2 and DsRed reporter genes can cause knockdown of target genes when expressed with the promoter and 5' UTR of target genes. Both Minos and Sleeping Beauty transposons can be used for the knockdown method. We found that 5'UTR is crucial for determining the target gene of knockout, and we showed that small antisense RNAs are produced from the 5'UTR in the knockdown lines. We knocked down a maternally expressed gene Ci-YB1 that encodes Y-box type RNA-binding protein. The animals in which maternal Ci-YB1 was knocked down showed abnormal development, suggesting that this gene is necessary for proper embryogenesis.

这项研究的目的是通过敲低方法来理解母体mRNA在ciona中母体mRNA定位的机理的靶向和特定敲低方法的表征。我们确定了敲低所需的DNA元素。当用启动子表达和靶基因的5'UTR时，EGFP，KAEDE，MKO2和DSRED报告基因可能会导致靶基因敲低。 Minos和睡美人转座都可以用于敲低方法。我们发现5'UTR对于确定敲除靶基因至关重要，并且我们表明在敲除线中从5'UTR产生了小的反义RNA。我们击倒了一个母体表达的基因CI-YB1，该基因CI-YB1编码Y-box型RNA结合蛋白。击倒母体CI-YB1的动物显示出异常的发育，这表明该基因对于适当的胚胎发生是必不可少的。

项目成果

Germline transformation in the ascidian C. intestinalis

海鞘中的种系转化 C.肠

• 作者: Yukihiko Kubota;Kayo Nagata,Asako Sugimoto and Kiyoji Nishiwaki;笹倉 靖徳
• 通讯作者: 笹倉 靖徳

Sleeping Beautyトランスポゾンを用いた脊索動物カタユウレイボヤの形質転換

使用睡美人转座子转化脊索动物海鞘

• 发表时间: 2011
• 作者: Fumi Kano;et al.;山本(日野)美紀;笹倉 暁子
• 通讯作者: 笹倉 暁子

カタユウレイボヤ卵を用いた母性mRNA の新規発現抑制系の開発

利用玻璃海鞘卵开发新的母体 mRNA 表达抑制系统

• 发表时间: 2013
• 作者: 飯塚貴子;佐藤瑛生;三田薫;保住暁子;濱田麻友子;佐藤矩行;笹倉靖徳
• 通讯作者: 笹倉靖徳