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Elucidation of the mechanism of pathogenicity of Rhodococcus equi in ruminants and establishment of a diagnostic method

马红球菌对反刍动物致病机制的阐明及诊断方法的建立

基本信息

批准号：
21K14975
负责人：
鈴木康規
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K14975/
关键词：
ロドコッカス・エクイ病原性プラスミドゲノム解析 RNA-Seq アンチセンスRNA プロモーター活性モノクローナル抗体自家生物発光 RP R. equi VapN Whole genome sequencing RNA Seq Monoclonal antibody

项目摘要

前年度の研究より、VapN発現にはvapNアンチセンス鎖（AS鎖）RNAによる発現制御が関与することを見出した。そこでAS鎖プロモーター配列を用いたDNAプルダウンを行い、本領域に特異的に結合する転写制御因子の特定を試みた結果、転写制御因子してGntRが同定された。続いて、非産生株のgntR欠損株及び補完株を作出した。gntR欠損株においてVapN発現が増加し、補完株でその発現が減少した。さらに、AS鎖プロモーター活性は、gntR欠損株において野生株と比較して有意に減少し、補完株で野生株と同程度まで活性が戻った。すなわち、VapN発現において、GntRによるAS鎖RNA発現を介した抑制機構が存在することが示唆された。前年度作出した抗VapNモノクローナル抗体を用いて、VapN産生株を感染させたマウスの免疫染色を行った結果、肝臓、脾臓の壊死性病変に陽性反応が認められた。また、VapN陽性R. equiに感染したと推定されるヤギおよびウシの免疫染色では、肺、リンパ節、肋骨などの壊死病変を有する臓器で陽性反応が認められた。本抗体を用いた免疫学的診断法は、類症鑑別やこれまで見逃されていた症例の特定に利用できる。また、本年度は自家生物発光を利用した病原性評価法の改良を行った。恒常発現プロモーターにluxABCDEをつなぎ、各種R. equi株に導入したところ、化学発光を検出し、菌数と発光強度に相関が認められた。また、それらの形質転換体を培養マクロファージに感染させた場合、細胞内で増殖可能な強毒株由来の形質転換体で発光を検出した。続いて、IVISを用いてマウス生体内における増殖性を検討した結果、強毒株由来の形質転換体では、投与3日後に肝臓と脾臓に発光を検出した。以上より、本自家発光株は、R. equiの病原性解析を強化するものと考えられる。

Research conducted in the previous year showed that the discovery of VapN is related to the discovery control of vapN open-access lock (ASlock) RNA. The DNA sequence of the AS lock is determined by the specific test results of the control factors in the field. In the middle of the day, the gntR of the non-producing plant is deficient and the plant is complete. The occurrence of VapN in gntR deficient plants increased, and the occurrence of complete plants decreased. In addition, the activity of ASL was decreased and the activity of ASL was decreased in comparison with wild plants. The expression of RNA in the RNA gene was detected by PCR. In the past year, the anti-VapN antibody was used, and the positive reaction of VapN producing strain was recognized. , VapN positive R. Equi infection is presumed to be caused by immunostaining of the lungs, joints and ribs. The antibody is used in immunological diagnostic methods, such as differential diagnosis and specific utilization of the disease. This year, we improved the pathogenic assessment method by using our own biological light. Constant occurrence of various R. Equi plant introduction, chemical emission, bacterial count and emission intensity In the case of infection, intracellular reproduction, and identification of the origin of virulent strains, the plasmid was isolated. In vivo, IVIS was used to detect the growth of the virus, and the origin of the virus was detected after 3 days of administration. The above R. Equi pathogenicity analysis is enhanced.