糖代謝制御の分子機構の解明に向けた代謝産物センサータンパク質の構造解析
代谢传感器蛋白的结构分析,阐明葡萄糖代谢控制的分子机制
基本信息
- 批准号:21K15034
- 负责人:
- 金额:$ 3万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
- 财政年份:2021
- 资助国家:日本
- 起止时间:2021-04-01 至 2023-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
当該タンパク質(CtBP2)と転写因子(FOXO1)の複合体構造解析の第一歩として、まずCtBP2単体の発現、構築、精製及び結晶化を行った。N末端にGSTタグ及びHRV 3C配列を付加したヒト由来CtBP2の大腸菌による大量発現に成功した。GSTアフィニティーカラムに吸着させた後、PreScission ProteaseでGSTを切断し、その後陰イオン交換カラム、ゲルろ過カラムで精製した。これを用いて結晶化スクリーニングを行ったが、良質な結晶は得られなかった。そこで、二次構造予測からN末端及びC末端付近のdisorder領域と推定された部分を除去したコンストラクトを用いて、同様の手順で発現、精製及び結晶化スクリーニングを行った。条件検討の結果,0.1 mm x 0.1 mm x 0.2 mmの単結晶を獲得した。得られた結晶を用いてX線回折実験を行い、PDB ID: 2OMEをモデルにした分子置換法によって構造を決定した。解析の結果、CtBP2は結晶中で四量体を形成しており、結晶化の際に加えていないのにも関わらずNADが結合していた。CtBP2とFOXO1の複合体構造解析を行うため、完全長FOXO1の大腸菌による発現系の構築を試みたが、発現は認められなかった。そこで完全長配列ではなく、ペプチドベースでの複合体構造取得を目指し、検討中である。
When the タ ン パ ク mass (CtBP2) と planning write factor (FOXO1) の complex structure の first step と し て, ま ず CtBP2 単 body の 発 now, building, refining and び crystallization を line っ た. N terminal に GST タ グ and び HRV 3 c match column を plus し た ヒ ト origin CtBP2 の coliform に よ る large 発 に success now し た. GST ア フ ィ ニ テ ィ ー カ ラ ム に sorption さ せ た, PreScission Protease で GST を cut し, そ の after Yin イ オ ン exchange カ ラ ム, ゲ ル ろ too カ ラ ム で refined し た. こ れ を with い て crystallization ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た が, good quality な crystallization は ら れ な か っ た. そ こ で, secondary structure can be か ら び C and N end end paying nearly の disorder field と presumption さ れ た part を remove し た コ ン ス ト ラ ク ト を with い て, with others in の hand shun で 発 now, refined and び crystallization ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. The condition 検 obtained the <s:1> result, 0.1 mm x 0.1 mm x 0.2 mm <s:1> 単 crystallization を obtained た た. Have ら れ た crystallization を with い て X-ray inflexion be 験 を い, PDB ID: 2 ome を モ デ ル に し た molecular displacement method に よ っ て tectonic を decided し た. Analytical の results, CtBP2 は を で four quantity body formation in crystallization し て お り, crystallization の interstate に plus え て い な い の に も masato わ ら ず NAD が combining し て い た. CtBP2 と FOXO1 の complex tectonic line analytical を う た め, long completely FOXO1 の coliform に よ る 発 try now is の build を み た が, 発 now は め ら れ な か っ た. そ こ で completely with long column で は な く, ペ プ チ ド ベ ー ス で の complex structure obtained を refers し, beg the 検 で あ る.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ patent.updateTime }}
大志田 達也其他文献
超好熱アーキア由来FAD依存性L-プロリン脱水素酵素の構造解析
超嗜热古菌 FAD 依赖性 L-脯氨酸脱氢酶的结构分析
- DOI:
- 发表时间:
2018 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
大志田 達也;冨家 英嗣;川上 竜巳;里村 武範;米田 一成;大島 敏久;櫻庭 春彦 - 通讯作者:
櫻庭 春彦
超好熱アーキア由来ヘテロ4量体型L-proline脱水素酵素とL-prolineの生合成
来自超嗜热古菌的异四聚体 L-脯氨酸脱氢酶和 L-脯氨酸的生物合成
- DOI:
- 发表时间:
2020 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
櫻庭 春彦;大志田 達也;川上 竜巳;米田 一成;大島 敏久 - 通讯作者:
大島 敏久
超好熱性細菌Thermotoga maritima由来アスパラギン酸キナーゼ/ホモセリンデヒドロゲナーゼ融合酵素(AK/HseDH)の分子特性
来自超嗜热细菌海栖热袍菌的天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶融合酶 (AK/HseDH) 的分子特征
- DOI:
- 发表时间:
2017 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
古場 康平;林 順司;大志田 達也;安部 展洋;米田 一成;大島 敏久;櫻庭 春彦 - 通讯作者:
櫻庭 春彦
畜肉の熟成によるリン脂質レベル変化に関する研究
畜肉老化引起的磷脂水平变化研究
- DOI:
- 发表时间:
2016 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
古場 康平;林 順司;大志田 達也;安部 展洋;米田 一成;大島 敏久;櫻庭 春彦;山下慎司・櫻井梨帆・及川奈代子・安田野原・上吉原怜奈・島田謙一郎・仲川清隆・木下幹朗・宮澤 陽夫 - 通讯作者:
山下慎司・櫻井梨帆・及川奈代子・安田野原・上吉原怜奈・島田謙一郎・仲川清隆・木下幹朗・宮澤 陽夫
超好熱アーキアPyrobaculum aerophilum由来新規ガラクトース1-リン酸ウリジリルトランスフェラーゼに関する研究
源自超嗜热古菌Pyrobaculum aerophilum的新型半乳糖1-磷酸尿酰基转移酶的研究
- DOI:
- 发表时间:
2020 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
大志田 達也;林 順司;米田 一成;大島 敏久;櫻庭 春彦 - 通讯作者:
櫻庭 春彦
大志田 達也的其他文献
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
相似海外基金
擬単結晶化合物発電層の創製および高靭性を有す太陽電池設計と曲げ特性の理解
赝单晶化合物发电层的制作、高韧性太阳能电池的设计、弯曲特性的理解
- 批准号:
23K22801 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
電子ビームを用いたアモルファスGeSnの室温・瞬間結晶化技術の確立と電気特性評価
非晶GeSn电子束室温瞬时晶化技术的建立及电性能评价
- 批准号:
23K23083 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
非平衡ポリモルフィック結晶化メカニズムの解明と電子デバイス応用
阐明非平衡多晶型结晶机理及电子器件应用
- 批准号:
23K26506 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
超階層構造スケルタル結晶化学とメゾスコピック機能
超层次骨架晶体化学和介观功能
- 批准号:
24H00470 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
「ガラスの結晶化による失透現象」を逆応用したバッテリーの熱暴走火災抑止材料の開発
逆转玻璃结晶导致的失透现象,开发电池热失控灭火材料
- 批准号:
24K17521 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
分子運動計測による蓄熱性低分子の冷結晶化挙動の解析
分子运动测量分析蓄热小分子的冷结晶行为
- 批准号:
24K08586 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
テルライト結晶化ガラスを用いた放射線励起時の発光過程の解明とシンチレータ開発
使用亚碲酸盐结晶玻璃和闪烁体开发阐明辐射激发过程中的发光过程
- 批准号:
24K03197 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
急冷過程でのガラスナノ結晶化を実現するガラス構造設計とそれを用いたデバイス創成
在快速冷却过程中实现玻璃纳米晶化的玻璃结构设计以及利用它创建的器件
- 批准号:
23K23056 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
革新的ヒ素処理技術の確立に向けたスコロダイト結晶化機構の解明
阐明臭葱石结晶机理,建立创新砷加工技术
- 批准号:
23K23384 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
表面超活性化による結晶化ガラスの常温成膜と全固体電池への展開
表面超活化微晶玻璃室温成膜及其在全固态电池中的应用
- 批准号:
23K26737 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 3万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)