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Identification of Novel Signal Recognition Factors for Mitochondrial beta-barrel Membrane Proteins

线粒体β-桶膜蛋白新信号识别因子的鉴定

基本信息

批准号：
21K15043
负责人：
ジャーマニーエドワード
金额：
$ 2.91万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

βバレル型膜タンパク質は、グラム陰性菌、ミトコンドリア、葉緑体に存在する。このうち、グラム陰性菌とミトコンドリアのものには共通の局在化シグナルとしてβシグナルが存在することが報告されている。βシグナルは、タンパク質の最もC末端側に位置している。われわれは、グラム陰性菌の一種である大腸菌を用いた解析から、タンパク質の内部に存在する新規シグナルを同定した。また、配列解析からこのシグナルがミトコンドリアにも存在していることを確認したが、ミトコンドリアでの役割については全く解析されていない。そこで、本研究では、ミトコンドリアにおける新規シグナルの役割解明と、このシグナルを認識するミトコンドリアタンパク質輸送因子を同定することを試みている。2年度目は、初年度に決定したミトコンドリアβバレルのシグナルを認識しアセンブリーを促進する因子の決定を目指した。具体的には、シグナル変異体をミトコンドリア内に送り込み、その際に相互作用するタンパク質の同定を目指した。輸送途上のタンパク質間相互作用は不安定なものが多いため、不安定なタンパク質間相互作用の補足が特異な部位特異的光架橋法を用いた。部位特異的光架橋法は、光架橋側鎖をもつ非天然アミノ酸であるBPAを目的タンパク質に導入することで、紫外線照射により近接するタンパク質との間に形成される共有結合を用いて相互作用タンパク質を捕捉できる手法である。当初、シグナル部分のみをミトコンドリアの膜間部に送り込み相互作用タンパク質の探索を実施したが、シグナル部分のみは膜間部で安定して存在できなかった。そこで、基質の全長を用いて解析する方法に変更した。現在、基質の全長を用いた方法でのBPAの導入に成功しており、今後相互作用タンパク質の決定を行う。

β-Barel-type membrane proteins, gram-negative bacteria, mitocondria, and chloroplasts exist. This is the first time that a negative bacterium has been identified. The position of the most terminal side of the β-ray is the position of the most terminal side of the β-ray, the position of the most terminal side of the β-ray. A new method for determining the presence of Escherichia coli in the interior of a plant is described. The analysis of the distribution of the data indicates that there is a problem with the distribution of the data. In this study, we try to find out how to determine the mass transfer factor of the new model. 2. The purpose of the annual decision is to determine the factors that promote the development of the enterprise. The specific purpose of this study is to identify the nature of the interaction between the two groups. The method of photo-bridging is applied to the interaction between mass and instability in transportation. site-specific photobridging method: photobridging side lock, non-natural acid, BPA target, substance introduction, UV irradiation, proximity, substance formation, common binding, interaction, substance capture, etc. In the beginning, the inner part of the membrane is stable, and the inner part of the membrane is stable. Therefore, the method for analyzing the entire length of the substrate has been improved. Now, the length of the matrix is determined by the successful introduction of BPA and the determination of the quality of future interactions.