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出芽酵母を用いた肥満制御因子ACBPの細胞外放出機構の研究

酿酒酵母肥胖调节剂ACBP胞外释放机制研究

基本信息

批准号：
21K15093
负责人：
平田恵理
金额：
$ 2.91万
依托单位：
The University of Tokyo (2022)Waseda University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15093/
关键词：
出芽酵母 ACBP 細胞外分泌 Acb1 Rim101 肥満

项目摘要

現代社会において、肥満率の増加は世界的な問題となっている。ごく最近になって、哺乳動物においてAcyl-CoA-binding protein (ACBP)の細胞外放出量が肥満をコントロールしている可能性が示唆された。しかしながら、ACBPがどうやって細胞外へ放出されているのか、その分子機構はほとんど分かっていない。そこで本研究では出芽酵母の遺伝学を用いてACBP放出経路の解明を目標とした。我々のこれまでの研究により、酵母のACBP放出に関わる遺伝子群の一次スクリーニングが完了している。同定した遺伝子群には細胞膜ストレス応答に必要なRim101経路や膜のリモデリングに必要なESCRT遺伝子群が含まれていた。一方で、他グループの先行研究で関与が示唆されていたオートファゴソーム形成に関連した遺伝子群は、我々のスクリーニング結果には含まれていなかった。また、前年度のACBP-NanoLucを用いた研究結果より、オートファジー関連遺伝子群の欠損株においても出芽酵母の培養上清にACBP-NanoLucが放出されている可能性を見出している。そこで本年度は、新たに作製したACBP抗体を用いて培養上清に放出されるACBPタンパク質をウェスタンブロットにより検出することを試みた。ACBPは細胞外に放出される際に切断を受ける可能性が示唆されているため、切断後のペプチド配列を認識する抗体も新たに作製し、　切断されたACBPタンパク質を検出できるか検証した。その結果、ACBP全長を認識する抗体を使用するとACBPのバンドが検出できることが確認された。一方で、切断されたACBPペプチドを認識する抗体ではバンドを検出することができなかった。しかしながら、今回検証したACBP全長を認識する抗体を用いることで、培養上清に放出されたACBPタンパク質を検出できる可能性が示唆された。

In modern society, the rate of obesity increases the problems of the world. The amount of extracellular Acyl-CoA-binding protein (ACBP) released from mammalian animals and mammals recently indicated that the possibility of extracellular release was instigated. The extraneous drugs were released from the cell and the molecular organs of the ACBP were divided into two parts. In this study, budding yeast was used to explain the way out with ACBP. I did a lot of research, and the yeast ACBP sent out a subgroup of yeast to finish the research. In the same way, the subgroup of the cell membrane contains the necessary Rim101. The subgroup of the membrane contains the necessary ESCRT. On the one hand, he said that he would study the situation first and instigated him to form a sub-group of children. In the previous year, the results of the ACBP-NanoLuc study showed that the subgroup of the yeast sprouts was not available. The supernatant of the yeast culture supernatant was released from the supernatant of the yeast culture. The possibility of the cell culture was not clear. This year, please use the supernatant of this year's culture to test ACBP antibodies. You can use the supernatant to release ACBP antibodies and test antibodies. ACBP said that the extracellular drug was released from the cell, and the possibility of being cut off indicated that it was possible to get rid of the virus. After the cut, the antibody was arranged, the antibody was added, and the antibody was cut. The antibody was cut off, and the antibody was cut. The ACBP was cut off. The results show that the full-length ACBP antibody can be used to confirm the diagnosis by using the whole ACBP system to confirm the error. On the other hand, cut off the ACBP to know that the antibody was not known. This time, the full length of the ACBP antibody was used to detect the possibility that the ACBP antibody could be detected.