亜鉛の吸収・動態制御に着目した加齢性疾患の予防法の確立

本年度は、消化管を介した亜鉛の吸収・動態制御機構の全容解明を目的とし以下の解析を行なった。1)亜鉛吸収に関わる輸送体の発現と細胞内亜鉛動態の解析亜鉛吸収に関与する輸送体ZIP4と亜鉛の排出に関わる輸送体ZNT1の発現の相関性および亜鉛動態との関連性をウエスタンブロット法および誘導結合プラズマ質量分析法 (ICP-MS)を用いて解析した。その結果、ZIP4の発現を誘導すると細胞内の亜鉛量が増加し、これに伴いZNT1の発現が上昇することを明らかとした。これらの発現制御によって、細胞内の亜鉛吸収がより効率的に行われることを示唆する新たな知見を得た。2)細胞内亜鉛送達因子の探索亜鉛の消化管吸収をより効率的に行うためは、吸収された亜鉛を効率的に細胞内送達するための亜鉛送達因子（亜鉛シャペロン）が存在すると考えられる。そこで本年度は、亜鉛シャペロン因子の候補となるタンパク質の探索を試みた。細胞内での亜鉛送達因子は、ZIP4により取り込まれた亜鉛の周辺に存在する可能性が高いと考えられる。そこで、遊離亜鉛イオンに応答し、周辺に存在するタンパク質をフルオレセイン（蛍光）標識することのできる、亜鉛コンディショナルプロテオミクス試薬（zinc-pro capture）を用い、ZIP4の発現誘導に応じて特異的に蛍光標識されるタンパク質の候補を探索した。具体的には、ZIP4を薬剤依存的に誘導させた株においてzinc-pro captureを処理し、周辺に存在するタンパク質を蛍光ラベル化し、細胞抽出液から、ZIP4誘導時にのみ蛍光標識化されるタンパク質を、抗フルオレセイン抗体を用いた免疫沈降により精製し、質量分析装置を用いて「亜鉛シャペロン因子」の候補の探索を試みた。その結果、ZIP4の発現誘導株のみで検出される幾つかの亜鉛シャペロンの候補となるタンパク質を見出した。この候補因子の機能について、今後より詳細な機能解析を行うことを計画している。

本年度は、消化管を介した亜鉛の吸収・動態制御機構の全容解明を目的とし以下の解析を行なった。1)亜鉛吸収に関わる輸送体の発現と細胞内亜鉛動態の解析亜鉛吸収に関与する輸送体ZIP4と亜鉛の排出に関わる輸送体ZNT1の発現の相関性および亜鉛動態との関連性をウエスタンブロット法および誘導結合プラズマ質量分析法 (ICP-MS)を用いて解析した。その結果、ZIP4の発現を誘導すると細胞内の亜鉛量が増加し、これに伴いZNT1の発現が上昇することを明らかとした。これらの発現制御によって、細胞内の亜鉛吸収がより効率的に行われることを示唆する新たな知見を得た。2)細胞内亜鉛送達因子の探索亜鉛の消化管吸収をより効率的に行うためは、吸収された亜鉛を効率的に細胞内送達するための亜鉛送達因子（亜鉛シャペロン）が存在すると考えられる。そこで本年度は、亜鉛シャペロン因子の候補となるタンパク質の探索を試みた。細胞内での亜鉛送達因子は、ZIP4により取り込まれた亜鉛の周辺に存在する可能性が高いと考えられる。そこで、遊離亜鉛イオンに応答し、周辺に存在するタンパク質をフルオレセイン（蛍光）標識することのできる、亜鉛コンディショナルプロテオミクス試薬（zinc-pro capture）を用い、ZIP4の発現誘導に応じて特異的に蛍光標識されるタンパク質の候補を探索した。具体的には、ZIP4を薬剤依存的に誘導させた株においてzinc-pro captureを処理し、周辺に存在するタンパク質を蛍光ラベル化し、細胞抽出液から、ZIP4誘導時にのみ蛍光標識化されるタンパク質を、抗フルオレセイン抗体を用いた免疫沈降により精製し、質量分析装置を用いて「亜鉛シャペロン因子」の候補の探索を試みた。その結果、ZIP4の発現誘導株のみで検出される幾つかの亜鉛シャペロンの候補となるタンパク質を見出した。この候補因子の機能について、今後より詳細な機能解析を行うことを計画している。